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神经介素S(Neuromedin S,NMS)是2005年分离纯化得到的一种新的神经肽,为G蛋白偶联受体NMUR-1(FM-3/GPR66)和NMUR-2(FM-4/TGR-1)的内源性配体,广泛分布于中枢神经系统及外周组织。近年来的研究证实,NMS主要通过其受体在动物体内发挥生理调节作用,包括神经内分泌、昼夜节律、能量代谢、应激和动物摄食等方面。到目前为止,关于NMS对家畜生殖功能调节方面的研究报道较少并且文献中未见有NMS对公猪生殖调控的研究报道。本文以3d、30d、60d、90d、120d的小梅山公猪为研究对象,通过荧光定量PCR和免疫组织化学技术,探索了出小梅山公猪生后生殖轴中NMS及其受体的发育性变化。结果如下:1、小梅山公猪NMS及其受体基因的克隆与分析本实验采用同源克隆技术克隆了小梅山公猪NMS及其受体(NMUR-1和NMUR-2)基因序列,并进行了生物信息学分析。结果显示,小梅山猪NMS前体蛋白原与其他物种在结构上十分保守,但与其他物种相比缺失了12个氨基酸。NMUR-1和NMUR-2的核苷酸和氨基酸序列与其它物种相比均具有较高的同源性。2、小梅山公猪生后生殖轴NMS及其受体NMUR-2mRNA的发育性变化采用荧光定量PCR技术检测了随机选取的生后3d、30d、60d、90d、120d五个不同日龄小梅山公猪下丘脑、垂体和睾丸三种组织中NMS和NMUR-2mRNA表达丰度的变化。结果显示,NMS及NMUR-2mRNA在小梅山公猪生后下丘脑、垂体、睾丸中都有表达,且呈现波动性变化。在下丘脑中,NMS及NMUR-2mRNA都呈现逐步升高的趋势,且于90d丰度最高,120d开始下降。但NMS mRNA60d时丰度略低于30d,而NMUR-2mRNA在60d时丰度高于30d。在垂体中,NMS及NMUR-2mRNA变化趋势不同,NMS呈现先降低后升高的趋势,其中60d丰度最低,120d丰度最高。而NMUR-2呈现先升高后降低的趋势,其中60d丰度最高。在睾丸中,NMS总体呈现逐步升高的趋势,但60d丰度明显低于其它d,而NMUR-2呈现先降低后升高的趋势,60d丰度最低,90d丰度最高。3、小梅山公猪生后下丘脑和睾丸组织中NMUR-2蛋白的发育性变化采用免疫组化技术检测了小梅山公猪生后下丘脑和睾丸组织中NMUR-2蛋白的发育性变化。结果显示:NMUR-2免疫阳性细胞主要存在于生后各个日龄小梅山公猪下丘脑室旁核和睾丸间质细胞中。在下丘脑室旁核中,随着日龄的增长,NMUR-2阳性细胞不断增大,数量不断增多,其中在60-90d时变化最明显。在睾丸中,生后30d到60d,睾丸间质细胞数量明显减少,但免疫阳性明显增强,90d和120d时NMUR-2免疫阳性反应与60d相似。本实验从基因和蛋白水平,研究了小梅山公猪生后各个阶段NMS及其受体NMUR-2的发育性变化。结果表明,NMS及其受体NMUR-2在小梅山公猪生后生殖轴发育过程中呈现发育性变化,提示NMS及其受体NMUR-2在生殖轴发育调控中可能发挥一定作用。调控机制有待深入研究。