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背景食管癌是我国最常见的发病率高、预后差的实体瘤之一,而河南省是其特征性高发区。尽管经过多年的努力,食管癌的发病率有所下降,但是食管癌的复发和转移率仍较高（34%-79%）,5年的生存率较低（20%-30%）。目前多采用放疗、化疗、手术等综合治疗控制疾病,但其复发、转移率仍居高不下,严重威胁人们的生命健康。复发和转移作为恶性肿瘤最重要的生物学特性,是导致治疗失败以致死亡的重要原因。研究表明,恶性肿瘤的侵袭、转移主要与肿瘤血管和淋巴管的形成有关。Notch信号通路是高度保守的信号通路,在胚胎和体细胞中的干细胞分化和自我更新中起作用,调控血管发生发展的多个方面。近年来发现Dll4-Notch信号通路是一种新的抗肿瘤血管生成靶点,通过与多种信号通路相互作用,共同调节血管的生成。血管内皮生长因子-C（VEGF-C）作为最先被发现的淋巴管生成因子,通过与相应的受体结合,刺激淋巴管的新生,从而促进肿瘤细胞在全身的扩散转移。研究表明,VEGF-C在淋巴管生成过程中发挥重要作用。全反式维甲酸（ATRA）是一种天然的维生素A的衍生物,参与胚胎发育和细胞生长、分化,而且与肿瘤细胞的增殖,凋亡和血管生成等密切相关,其在急性早幼粒细胞白血病的治疗中更是发挥显著作用。目前已证实ATRA对多种实体瘤细胞包括食管癌具有促进分化及诱导凋亡的作用,并可能通过调节多种信号通路来抑制肿瘤血管的生成。也有研究表明维甲酸和Notch通路在皮肤及神经干细胞中相互作用,而关于ATRA对食管癌中Notch信号通路及淋巴管生成相关因子影响的研究尚不充分。本实验在体外实验中观察ATRA通过维甲酸受体β（RAR-β）对食管癌细胞系KYSE70中Notch1、Dll4、VEGF-C蛋白表达的影响,为ATRA在食管癌抗血管、淋巴管生成方面进一步提供理论依据。目的探讨全反式维甲酸及RAR-β激动剂或拮抗剂对食管癌KYSE70细胞系增殖、迁移的影响,及对Notch1、Dll4、VEGF-C蛋白表达的调节,初步探索ATRA对食管癌抗血管和淋巴管生成的可能机制。方法将处于对数生长期的KYSE70细胞随机分为4组,分别为:ATRA组、ATRA+CD2314组、ATRA+LE135组和空白对照组,采用免疫蛋白印迹法（Western blot）检测经不同药物处理后各组食管癌细胞RAR-β蛋白表达情况;采用CCK-8法测定经不同药物处理后各组食管癌细胞的增殖情况及细胞活力的变化;通过划痕实验检测ATRA联合维甲酸受体激动剂或抑制剂分别对KYSE70细胞在0h和24h的细胞迁移能力的影响;采用Western blot法测定不同分组药物分别作用食管癌细胞48h后,Notch1、Dll4和VEGF-C蛋白的表达情况。结果1.Western blot结果:细胞按实验分组:即ATRA+LE135组（ATRA终浓度为10μmol/L,LE135终浓度为1μmol/L）,ATRA组（ATRA终浓度为10μmol/L）及ATRA+CD2314组（ATRA终浓度为10μmol/L,CD2314终浓度为1μmol/L）分别处理48h后,各组RAR-β蛋白相对表达量分别是:（11.33±0.99）×10-2、（28.32±0.93）×10-2及（33.70±0.77）×10-2,对照组为（20.00±0.99）×10-2。经统计学分析,与对照组相比,各实验组的RAR-β蛋白表达量均发生明显变化,均具有统计学差异（p<0.05）;实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义（p<0.05）。2.CCK-8结果:在作用24h后,各实验组,即ATRA+LE135组、ATRA组及ATRA+CD2314组相对于对照组的增殖抑制率分别为:24.39%、29.04%及36.7%;经过48h后,上述各实验组的增殖抑制率依次是:30.83%、40.29%及50.1%。在72h后,各实验组的细胞增殖抑制率分别是:40.46%、51.5%及62.1%。经统计学分析,各实验组与对照组相比,差异均具有统计学意义（p<0.05）,ATRA联合RAR-β激动剂CD2314组与ATRA组相比,对KYSE70细胞的增殖抑制能力增强;ATRA联合RAR-β抑制剂LE135组与ATRA组相比,对KYSE70细胞的增殖抑制能力减弱,且差异均具有统计学意义。3.细胞划痕实验结果:作用于24h后,各实验组,即ATRA+LE135组、ATRA组及ATRA+CD2314组相对于0h的细胞的迁移率分别为（60.06±1.01）%、（47.17±2.17）%及（32.50±0.89）%。对照组的迁移率为（74.45±0.49）%,各实验组分别与对照组相比,差异均具有统计学意义（p<0.05）,各实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义（p<0.05）。4.Western blot结果:各实验组:即ATRA+LE135组、ATRA组及ATRA+CD2314组分别作用于KYSE70细胞48h后,Notch1的相对表达量分别是:（52.9±1.24）×10-2、（108.31±1.77）×10-2及（117.60±3.02）×10-2,对照组是（81.36±0.77）×10-2。Dll4蛋白的相对表达量依次是:（47.04±1.44）×10-2、（30.59±0.52）×10-2及（26.51±2.37）×10-2,对照组是（50.37±1.32）×10-2。VEGF-C的相对表达量分别是:（93.12±2.32）×10-2、（53.97±2.09）×10-2及（26.90±2.06）×10-2,对照组是（117.28±3.17）×10-2。经统计学分析,各实验组对比对照组,差异均具有统计学意义（p<0.05）,各实验组两两相比,差异均具有统计学意义。结论1、RAR-β表达增加不仅增强了ATRA对食管癌KYSE70细胞增殖及迁移能力的抑制作用,也增强了ATRA对Notch1蛋白表达上调、对Dll4和VEGF-C蛋白表达下调的调节作用。2、ATRA可能通过增强食管癌细胞Notch1表达,抑制Dll4、VEGF-C表达,影响Dll4-Notch1信号通路并干扰淋巴管生成,进而抑制肿瘤血管、淋巴管的生成。