论文部分内容阅读
机体在应激条件下会使生理功能维持在一定范围而做出反应,但长期应激会影响中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）和下丘脑-垂体-肾上腺轴（Hypothalamic-Pituitary-Adrenal axis,HPA）,损伤神经元,导致精神错乱,产生抑郁或认知障碍等症状。因此,寻找具有神经保护作用和安全有效的抗应激活性物质一直是科研热点。本论文采用活性跟踪分离的方法从党参、葫芦巴、绞股蓝、远志、黄芪、银杏叶、白芍等7种天然植物中筛选抗应激功能成分,通过建立PC12细胞损伤模型和小鼠慢性束缚应激模型,研究其对神经应激的防护作用及机制。建立体外乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶-A抑制模型,柱层析分离纯化,筛选出抑制率最高的葫芦巴组分FSF(IC50为25.80μg/mL和190.59μg/mL)。LC-MS/MS分析FSF活性成分及百分比:山萘酚3-（对香豆素）葡萄糖苷:槲皮素4’-O-β-d-吡喃葡萄糖苷:芹菜素4’,7-O-二葡萄糖苷:夏佛塔苷:异夏佛塔苷:芹菜素8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷=5.58:16.54:21.98:30.94:19.2:5.76。建立皮质酮诱导的PC12细胞损伤模型,评价FSF对PC12细胞的保护作用。结果表明,与皮质酮模型组相比,FSF能提高细胞活力（86.8±6.4%,P<0.01）、降低LDH释放率（44.7±4.7%,P<0.01）、减少凋亡细胞数量、降低AChE活性（15.40±1.58 U/104 cell,P<0.01）和MAO-A活性（115.4±7.6%,P<0.01）,证明FSF对皮质酮损伤的PC12细胞具有神经保护作用。建立小鼠慢性束缚应激模型,通过行为学检测和生化指标测定,研究FSF的神经保护作用及机制。结果表明FSF通过降低小鼠强迫游泳实验和悬尾实验的不动时间（P<0.05,P<0.01）,增加糖水偏好程度（P<0.01）,恢复慢性束缚应激引起的抑郁样行为。FSF显著降低慢性束缚应激诱导的血清皮质酮水平（P<0.01）;增加前额皮质神经递质（ACh,NE,5-HT和DA）、海马神经递质（ACh,NE,5-HT和DA）和纹状体神经递质（NE）含量（P<0.05,P<0.01）。FSF表现出对前额皮质和海马中AChE和MAO-A活性的显著抑制作用（P<0.01）。FSF可显著下调前额皮质和海马中的KLF11,SIRT1和MAO-A蛋白表达水平,通过KLF11/SIRT1-MAO-A途径抑制MAO-A表达和活性,上调单神经递质水平,进而对慢性束缚诱导的神经应激产生防护作用。本研究揭示了葫芦巴黄酮FSF对神经应激损伤的防护作用及机制,并对开发新型抗应激天然产物具有一定的参考意义。