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1目的本实验研究利用基因转染技术使人HepG2细胞过表达X基因,通过细胞培养、细胞流式、荧光显微镜及PCR、Western Blot等方法来探讨X基因对其HNF-4α及NF-κB表达的影响从而了解X基因与INF-4α、NF-κB及肝癌细胞的关系。2方法将HepG2人肝癌细胞分为3组：转染HBx细胞组：用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3/HBx瞬时转入HepG2细胞；以转染空载体细胞组和未转染HepG2细胞组作为对照组。通过显微镜下观察对比肝癌细胞培养的生长情况,以细胞流式及荧光显微镜检测不同组的肝癌细胞增殖情况,PCR检测各组X基因表达,HNF-4α及NF-κB的mRNA表达情况,Western Blot检测NF-κB蛋白的表达情况,来探讨X基因对其HNF-4α及NF-κB表达的影响。3结果3.1一般情况HepG2肝癌细胞培养在含10%胎牛血清的培养液中,以脂质体转染的方法分别分成转染HBx细胞组,转染空载体细胞组和未转染HepG2细胞组。转染HBx细胞组的HepG2肝癌细胞于37℃孵育72小时,生长较其他两个组的肝癌细胞密集。转染空载体细胞组和未转染HepG2细胞组的细胞生长一般,未见异常增殖。3.2各组细胞的细胞流式增殖分析及荧光显微镜图像分别将转染HBx细胞组,转染空载体细胞组和未转染HepG2细胞组的细胞通过细胞流式和荧光显微镜分析细胞的增殖情况。细胞流式增殖分析：细胞流式仪检测各组的细胞增殖情况,转染HBx细胞组肝癌细胞处于增殖期Dip G2:5.68%at192.21。荧光显微镜图像：转染HBx细胞组的HepG2肝癌细胞于37℃孵育72小时处于增殖期的细胞比率为0.47。转染空载体细胞组处于增殖期的细胞比率为0.28。未转染HepG2细胞组处于增殖期的细胞比率为0.25。3,3RT-PCR法检测检测肝癌细胞内HNF-4α及NF-K B的基因的表达。检测转染HBx细胞组,转染空载体细胞组及未转染HepG2细胞组中肝癌细胞内HNF-4α及NF-κB基因的表达情况。转染HBx细胞组中HNF-4α的表达值为0.24,而NF-K B的表达值为1.13。转染空载体细胞组HNF-4α的表达值为0.69,而NF-κB的表达值为0.59。未转染HepG2细胞组INF-4α的表达值为0.66,而NF-K B的表达值为0.46。由此看出,转染HBx细胞组中HNF-4α的表达少于其他两个组,而NF-K B的表达多于其他两个组。在同一组中,HNF-4α的表达与NF-K B的表达呈负相关。3.4Vestern-blot法检各组细胞内NF-K B的蛋白水平。检测转染HBx细胞组,转染空载体细胞组及未转染HepG2细胞组中肝癌细胞内NF-K B蛋白的表达情况。转染HBx细胞组中NF-κB蛋白的表达值为1.019。转染空载体细胞组NF-K B的表达值为0.294。未转染HepG2细胞组NF-κB的表达值为0.487。由此看出,转染HBx细胞组中NF-κB蛋白的表达值明显高于其他两个组。与NF-κB RNA表达的PCR结果相一致,与X基因的表达成正相关。4结论成功将X基因转染入HepG2细胞,并在细胞中表达,X蛋白抑制HNF-4α的表达,促使NF-κB的活性增强,可能促进肝癌细胞增殖致其癌变及生长转移等方面加速。