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慢性髓细胞白血病（CML）是一种造血干细胞恶性克隆增生性疾病，具有特征性的费城染色体（Philadelphia chromosome,ph+），是由原位于9号染色体的c-abl基因与原位于22号染色体上的bcr基因发生部分序列的交叉易位所形成的嵌合染色体。嵌合基因bcr-abl表达融合蛋白Bcr-Abl。该融合蛋白具有酪氨酸激酶活性，与CML的致病机理密切相关。在HL-60／Bcr-Abl和K562细胞中，Bcr-Abl蛋白的表达可以使细胞产生抵抗凋亡的信号，包括Bcl-XL；而BcI-XL的表达可以抑制线粒体膜通透性转运孔的开放，阻碍线粒体释放细胞色素C，从而抑制caspases的激活，如caspase-3，抑制凋亡。抑制Bcr-Abl蛋白的激酶活性可作为治疗CML的有效途径。 ST1571作为一种新近开发的抗CML药物，与Bcr-Abl蛋白的激酶活性位点结合，阻碍其对底物的磷酸化，体外实验证实2μmol／L ST1571显示出良好的抗CML作用，具有良好的应用开发前景。但是与其他抗肿瘤药物一样，CML病人也会对其产生耐药性，有必要进一步改进或与其他药物联合应用以提高疗效降低耐药性。三氧化二砷（As2O3）首先被用于急性早幼粒白血病（APL）病人的控制性研究，对于复发和难治性APL，As2O3治疗可获得52％-92％的完全缓解率。随后研究者又探讨了As2O3在治疗CML中的作用。As2O3在浓度为1μmol／L时可以诱导K562细胞凋亡，并下调Bcr-Abl蛋白水平。但其确切的诱导K562细胞凋亡的机理还不清楚。本实验的目的：（1）比较As2O3和ST1571联合应用与单独应用对郑州大学硕士研究生毕业论文AsZo3，sTI571诱导K562细胞凋亡过程中easpase一3，Bel一x:蛋白水平的变化K562细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用，为临床联合用药提供理论基础。（2）检测比较AsZo3与sT1571分别与联合诱导’K562细胞凋亡过程中，caspase一3与Bel一xL的表达变化，以探讨其诱导K562细胞凋亡的机制。 材料与方法: 我们以K562细胞为模型，在含10%胎牛血清的1 640培养液中，37℃，5%CO:培养。取对数生长期的K562细胞随机分为四组。 I组:1640+10%胎牛血清 11组:在1640+10%胎牛血清培养液中加入1 p mol/L AsZo: 111组:在1 640+10%胎牛血清培养液中加入2 p mol/L STI571 IV组:在1640+10%胎牛血清培养液中)] 11入1 p mol/LAsZO3+Zpmol/LSTI571 四组连续培养5天。采用细胞计数、台盼蓝染色观察比较各组药物对K562细胞的增殖抑制作用;，姬姆萨染色及DNA琼脂糖凝胶电泳方法，研究了各组药物对K562细胞诱导凋亡的作用。应用Western blot检测各组K562细胞easpase一3及BcL一xL蛋白表达水平的变化。 结果: （l）l“mol/L AsZO3与2 p mol/L STI571均可抑制K562细胞增殖，（p<0·05）。1 p mol/L AsZO3与Zpmol/LsT1571联合应用后与两药单独应用相t匕，抑制增殖作用进一步增强（P<0.05）。（2）两种药物单独作用或联合作用48h后均可诱导K562细胞出现凋亡改变，姬姆萨染色表现为染色质浓缩，核着边现象，DNA琼脂糖凝胶电泳出现“梯”状带。（3）1 0 mol/L AsZo3与2 p mo一/L sTI571分别作用于K562细胞36h后出现caspase一3蛋白的激活，两种药物同剂量联合应用较单独应用，作用进一步增强（尸<0、01）。（4）Zpmol/LST1571作用36h后BcL一xL的蛋白水平下调，（P<0.01）;1 p mol/L ASZO3作用36h后也可下调BcL-xL的蛋白水平，但与Zpmol/LSTI571相比作用较弱，（P<0.01）;两种药物同剂量联合应用36h后其下调BcL一xL的作用比单独应用明显增强（尸<0.01）。 结论:郑州大学硕士研究生毕业论文As20〕，sT157I诱导K562细胞凋广:过程‘扣caspase一3，Bcl一xl蛋白水平的变化 ST巧71与AsZO3可抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡。STI571作为凋亡诱导剂，可通过抑制BcL一xL的表达从而激活casPase一3诱导K562细胞凋亡。As203诱导K562细胞凋亡过程中伴有caspase一3的激活，但其作用并非完全是通过下调Bc卜xL蛋白水平而实现的，两种药物的作用机制不同。511571与ASZo:联合应用具有协同抑制效应，两种药物联合应用后可增强其激活caspase一3及下调BcL一xL的能力，从而进一步抑制K562细胞增殖和诱导凋亡。