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第一部分建立C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的影响因素探究目的探究建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）C57BL/6小鼠模型过程中的不同因素如髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG 35-55)及百日咳毒素（Pertussis toxin,PTX）浓度变化差异对建模成功率、死亡率的影响。方法1.实验材料:选用30只雌性C57BL/6小鼠,鼠龄6周,体重16-18g购自甘肃省中医药大学动物研究中心（甘肃,兰州）。小鼠饲养于兰州军区总医院动物实验科SPF级无菌动物实验室,维持室温（22-26℃）及光-暗12h交替循环环境,供应足够的食物及洁净水。本实验已获兰州大学兰州大学第二医院动物实验伦理审查审批（审批号:2017-D037）通过。2.EAE模型建立及影响因素控制:将30只C57BL/6小鼠进行分组,随机分为空白组、对照组、MOG组及PTX组,根据分组需要将不同浓度的MOG35-55与完全弗氏佐剂（Freund’s adjuvant complete,CFA）混合乳化后在小鼠脊髓两侧皮下四点法注射,在MOG35-55免疫的1d及3d腹腔注射不同浓度的PTX,至少2名实验员每天进行称重及临床评分。得到的数据用SPSS 22.0（IBM,Chicago,IL,USA）采用重复测量方差分析,组间分析用成组t检验。获得的组织送兰大二院病理科行HE染色。结果1.空白组小鼠存活良好,体重稳步增长,并稳定于20-21g;对照组在第7天开始出现明显的体重下降,最早于第7天开始发病,第17天达到高峰,发病率100%,死亡率20%;MOG组在第5天开始出现体重下降,最早于第6天开始发病,第17天达到高峰,发病率100%,死亡率0%;PTX组在第10天开始出现体重下降,最早于第10天开始发病,于17天达到高峰,发病率100%,死亡率0。2.根据统计学分析得到的结果提示:对照组、MOG组、PTX组之间的体重差异有统计学意义（P<0.01）、临床评分也有统计学差异（P<0.01）,组与组之间的检验中,对照组与MOG组之间没有统计学差异（P>0.01）,PTX组与对照组及MOG组之间有统计学差异（P>0.01）。3.建模组小鼠脑组织、脊髓炎性细胞广泛浸润。第二部分雷帕霉素与甲泼尼龙对C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型治疗的探索目的通过观察与甲泼尼龙琥珀酸钠对比,评价雷帕霉素治疗C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的效果。方法选择本小组完成建模的评分为2.0-4.0分的EAE模型小鼠分为对照组、雷帕霉素组及甲泼尼龙组,建模过程依照第一部分对照组,分别腹腔注射生理盐水、甲泼尼龙琥珀酸钠及雷帕霉素共7天,至少2名实验员每天进行称重及临床评分。得到的数据用SPSS 22.0（IBM,Chicago,IL,USA）采用重复测量方差分析,组间分析用成组t检验。获得的组织送兰大二院病理科行HE染色。本实验已获兰州大学兰州大学第二医院动物实验伦理审查审批（审批号:2017-D037）通过。结果1.EAE组的小鼠体重稍有下降,但是基本在16g上下波动,无明显改变;甲泼尼龙（甲强龙）组小鼠从治疗第二天开始体重明显上升,3-7天上升趋势稍有减缓但仍明显上生;雷帕霉素组小鼠在治疗后体重波动,无明显下降或者上升。EAE组的小鼠临床评分缓慢上升,提示症状缓慢加重,其中2只在实验第5天死亡;甲强龙组小鼠临床评分缓慢下降,提示病情稳定好转;雷帕霉素组小鼠临床评分在治疗前3天波动不明显,于第4天突然升高并呈上升趋势,提示病情加重其中1只在治疗第四天死亡。2.根据统计学分析结果显示:EAE组、雷帕霉素组、甲泼尼龙组之间的体重变化和临床评分差异均无统计学意义（P>0.01）,组间的对比中EAE组和雷帕霉素组之间的临床评分差异有统计学意义（P<0.01）,其余比较均无统计学意义（P>0.01）。3.HE染色显示随着病程进展,EAE组及雷帕霉素组小鼠神经元损伤加重,甲泼尼龙组减轻,雷帕霉素对胶质细胞增生无明显改善。