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马勃(puffball)为常用真菌类中药,其基源主要为大秃马勃Calvatia gigantea、脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii和紫色马勃Calvatia lilacina(Mont.et Berk)Lloyd的干燥子实体。马勃的人工栽培尚处于起步阶段,液体发酵菌丝具有培养周期短、产品质量稳定、便于工业化生产等优点,且发酵液和子实体一样也有抑菌、抗炎等药理作用。因此,利用液体发酵技术进行马勃的生产一个重要的经济价值。
本研究以大秃马勃Calvatia gigantea和脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii 为研究材料,进行了马勃孢子的萌发条件研究,并以大秃马勃Calvatia gigantea菌种为研究材料,进行了优化培养和发酵液药理实验的初步研究,结果如下:
采用DNA 分子鉴定技术对采集的样品进行了分子鉴定,结果为大秃马勃Calvatia gigantea和脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii。利用rDNA ITS 序列进行分析并建构系统发育树,结果表明了脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii和大秃马勃Calvatiagigantea的亲缘关系较近,根据分子系统发育进化树可将其归属伞菌亚纲、伞菌目。
对大秃马勃Calvatia gigantea和脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii的孢子萌发进行了不同温度、不同营养物及浓度和光照等条件对其孢子萌发影响的研究。结果表明,25℃是马勃孢子萌发的适宜温度;2%的葡萄糖和Bonar 液可促进孢子萌发,而氯化钠则对孢子萌发有抑制作用;光照或黑暗对孢子萌发无影响;来源于两个不同年份的孢子的萌发率差异不显著。
研究了不同培养基、不同培养条件对大秃马勃Calvatia gigantea菌丝体生长的影响。结果表明:综合PDA 培养基为大秃马勃Calvatia gigantea的最佳培养基,并在此基础筛选到麦芽糖为最佳碳源。最适菌丝体生长的条件为:培养温度为26℃、pH 值为6.0。
利用L9(3)3 正交试验筛选出了大秃马勃Calvatia gigantea 液体深层发酵的优化培养基。结果表明:最佳碳源和氮源分别为蔗糖、马铃薯和黄豆粉,最佳的水平组合为蔗糖20g/L、马铃薯粉300g/L、黄豆粉30g/L;得到的最佳培养条件为6d的种龄,10%的接种量、100mL/250mL的装液量,初始pH6.0,28℃培养温度,180r/min的摇床转速,培养时间为12d。
大秃马勃Calvatia gigantea 发酵液的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取物进行二甲苯诱导小鼠耳廓急性炎症和醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性实验,结果表明大秃马勃Calvatia gigantea 发酵液石油醚提取物处理组、乙酸乙酯提取物处理组对二甲苯诱导小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用;大秃马勃Calvatia gigantea 发酵液乙酸乙酯提取物处理组、正丁醇提取物处理组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性具有明显的抑制作用。在抑菌试验中,大秃马勃Calvatia gigantea 发酵液的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的萃取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌有明显的抑制作用。