目的:1、探究细胞膜固定在多孔羟基硅球上的机理,促进用于色谱方法的仿生载体的制备。2、通过建立细胞和动物模型探讨注射用益气复脉(冻干)(yi qi fu mai powder injection,YQFM)对阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的心脏毒性的保护作用。方法:以兔红细胞为原材料,使用低渗透膨胀法获取细胞膜。在减压震荡条件下制备兔红细胞膜修饰载体的固定相。根据载体类型、多孔硅球的孔径、酶活性及细胞膜固定化动力学进行了批处理固定化研究。利用高效液相色谱考察不同孔径的多孔硅球载体色谱柱与阳性药物的结合能力和稳定性。通过共聚焦显微镜进一步观察制备的多孔和无孔硅球上通过荧光标记的细胞膜的分布情况。YQFM对DOX诱导的心脏毒性的保护作用研究是先建立DOX诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤模型:提前2 h给予不同浓度的YQFM,再与DOX共同培养48 h。CCK-8测定细胞存活率;再分别检测乳酸脱氢酶(LDH)、ATP含量;Hoechst染色法检测DOX损伤H9c2细胞的凋亡情况;JC-1探针法检测H9c2细胞的线粒体膜电位;Western-blot法检测caspase-3的表达情况。然后,再建立DOX诱导小鼠心肌损伤的急性和慢性模型。通过测定小鼠体重和心脏指数变化,血清肌酸激酶(CK)的水平以及心脏组织的HE染色初步判断YQFM的药效。结果:我们根据载体类型、多孔硅球的孔径、酶活性及细胞膜固定化动力学研究发现多孔硅球表面的硅羟基作为一种极性配体对细胞膜表现出强烈的吸附不可逆作用。同时,发现适当的孔径会增加细胞膜插入孔隙通道的量;插入孔隙的细胞膜在多孔硅球的表面会通过自我融合形成完整和稳定膜涂层。多孔硅球细胞膜色谱柱在阳性药物尼莫地平证实下具有高保留因子和良好的稳定性。最后,通过激光扫描共聚焦显微镜进一步证实了细胞膜固定化是插入/自融合机理。同时,证实细胞膜必须在多孔表面才能实现良好的固定。YQFM对DOX诱导的心脏毒性保护作用研究的细胞实验中发现DOX降低H9c2细胞存活率的情况下,YQFM预处理后呈剂量依赖性提高H9c2细胞的存活率。YQFM预处理组明显降低细胞内LDH活性,增加ATP含量,与DOX对照组相比。通过Hoechst染色法和JC-1探针法证实YQFM预处理组可显著减少DOX诱导的细胞凋亡,减轻线粒体膜电位下降。Western-blot法检测caspase-3的结果显示YQFM下调caspase-3的表达,减少细胞凋亡。DOX诱导小鼠心肌损伤急性模型的DOX剂量确定为20 mg/kg,慢性模型的DOX剂量为3 mg/kg隔日一次,共6次。小鼠体重变化和心脏指数的结果发现给药组和对照组无显著性差异。测定血清中CK指标结果发现急性模型中YQFM给药组降低CK的含量。心脏组织HE染色结果显示在急性、慢性模型中YQFM给药组对DOX诱导的心肌损伤的情况都有保护作用。结论:我们成功证明了细胞膜固定化是插入/自融合机理。通过考察载体的类型,多孔硅球的孔径,酶活性和细胞膜固定的动力学说明了机理。共聚焦照片进一步证实了细胞膜固定化的插入和自融合过程。细胞膜固定化机理的澄清有助于增强固定化膜蛋白载量和改善色谱柱的稳定性,并为其他生物载体的制备提供参考。YQFM对DOX心脏毒性的保护作用研究证实YQFM抑制DOX对H9c2细胞的凋亡,减轻心脏组织的损伤,可能是通过细胞凋亡机制来抑制的。通过细胞模型,动物模型,检测细胞存活率、线粒体膜电位、细胞凋亡、心肌酶等方面来证明。从而为临床上合理用药提供一定的理论依据。