舌癌(carcinoma of tongue)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，我国舌癌约占口腔恶性肿瘤的43.4％，居口腔癌之首。近几十年来，肿瘤治疗技术、设备迅速发展，各种外科治疗技术不断提高和完善，但舌癌患者五年生存率仍然不足60％。因此寻找新的治疗方法，以期提高舌癌患者的生存率和生存质量是十分必要的。　　 DNA复制是细胞周期、发育以及癌症形成当中的关键事件。真核生物中，为保证遗传物质精确传递到子代，一个细胞周期中DNA只能复制一次。DNA获得复制的能力是通过各种相关调控蛋白与DNA复制起始点顺序性结合而实现的。而细胞分裂周期蛋白(Cell division cycle protein 6，Cdc6)是DNA复制的首要因子，是形成复制前复合体(Pre-replication complex，Pre-RC)的主要成分，是确保细胞在细胞周期中只复制一次的重要因子。肿瘤细胞是典型的恶性增殖细胞，在无序增殖的同时伴随着DNA复制，在肿瘤细胞中存在高表达的Cdc6蛋白。本课题组前期研究结果显示：Cdc6在正常口腔粘膜中不表达或者低表达，而在癌前病变和舌癌组织中表达显著上调且表达量逐渐增强。这一理论依据为舌癌的早期诊断及治疗提供了新的思路。　　 本项目拟应用RNA干扰技术，靶向抑制舌癌细胞CAL-27中Cdc6的表达，观察Cdc6慢病毒载体对舌癌细胞CAL-27的敲减效能以及舌癌CAL-27细胞的增殖、凋亡等改变，初步探讨下调Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制，为舌癌的靶向分子治疗提供新途径。　　 方法：　　 1.实验分组：实验分四组，分别为CON、NC、KD1、KD2组。CON为正常目的细胞，未感染任何病毒的细胞组；NC为加阴性对照病毒感染的细胞组；KD1、KD2为加RNAi靶点病毒感染的细胞组；　　 2.慢病毒转染人舌癌细胞系CAL-27细胞，探索载体体外最佳转染滴度；　　 3.Real time PCR和Western Blot检测RNA干扰对CAL-27细胞Cdc6mRNA和蛋白表达水平的敲减效能；　　 4.流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期；　　 5.MTT法检测CAL-27细胞生长水平。　　 结果：　　 1.RNAi慢病毒载体可成功感染舌癌CAL-27细胞株，最佳感染条件为MOI=50；　　 2.Real time PCR结果显示：KD1和KD2组在CAL-27细胞中对Cdc6基因的表达均有显著敲减效果。相对NC组，KD1、KD2组对Cdc6基因敲减效率分别为55.60％和64.38％(p＜0.001)；　　 3.Western Blot结果显示：感染靶向Cdc6 RNAi慢病毒载体后，CAL-27细胞Cdc6蛋白表达水平明显下降，KD1、KD2组较NC组Cdc6蛋白表达降低分别为44.44％、66.67％(p＜0.001)；　　 4.流式细胞仪检测细胞周期显示：感染慢病毒载体后，KD1组、KD2组两组舌癌细胞CAL-27细胞凋亡率较NC组均有显著上升，分别为57.55％和83.81％(p＜0.001)，且KD2组细胞凋亡率较KD1组更高(p＜0.05)；　　 5.MTT法检测细胞生长水平：KD1及KD2组细胞较NC组生长水平受到抑制，KD1和KD2组细胞生长抑制率分别为34.78％和36.52％(p＜0.001)。　　 结论：　　 靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效下调舌癌CAL-27细胞中Cdc6mRNA和蛋白的表达水平，抑制CAL-27细胞的DNA复制，阻止舌癌细胞的增殖。Cdc6有望成为治疗舌癌的新靶点。