研究背景：　　心肌缺血/再灌注损伤一直是心血管疾病领域的研究热点，但是它的发生机制目前尚不清楚。虽然在过去的几十年里，对心肌缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）损伤的病理生理以及保护性干预进行了大量研究，但是这些研究成果向临床的转化却并不理想。究其原因可能就在于，目前的研究大部分都集中在恢复心肌细胞的血供、保护心肌细胞上了，而忽视了给它们提供血液的微血管本身的损伤及作用。心肌I/R时微血管损伤（MVD）的病理生理后果主要体现在两方面：微血管阻塞（即无复流现象）；微血管屏障功能丧失（即微血管的通透性增高）。无论是无复流，还是微血管通透性增强，都可能使各种保护性治疗措施，包括再灌注本身，难以奏效。器官、组织发生I/R时，引起MVD的机制主要有氧化应激、炎症反应以及血小板激活和白细胞聚集等。　　槲皮素（quercetin，Que）作为一种广泛存在于食物中的天然抗氧化剂，具有很强的抗氧化作用，还可抑制血小板的聚集、调节血小板激活因子的生成。槲皮素的这些抗氧化、抗血小板作用使得我们有理由推测，它可能具有减少I/R时微血管漏出的作用，但槲皮素抗氧化等作用的分子机制尚不明确，这也成为限制其进一步研究开发和临床应用的瓶颈。　　Sirtuins（属于Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶家族）是高度保守的蛋白家族，首次发现于酵母细胞，是 NAD+依赖的表观遗传和代谢调节因子。其中Sirt1（沉默信息转录调控因子1，silent information regulator of transcription 1）是Sirtuins家族中最知名的成员，可通过组蛋白或其他细胞因子（如转录因子 p53、NF-κB、FoxO1，FoxO3，FoxO4和转录调节子PGC-1）的去乙酰化来调节细胞的存活、复制性衰老、新陈代谢、炎症反应及氧化应激损伤。近年来有研究显示，口服槲皮素可通过上调AMPK和Sirt1的表达，抑制高脂饮食小鼠脂肪组织巨噬细胞的渗出和炎症反应。Hung CH等人发现，槲皮素可激活Sirt1，调节AMPK/NADPH氧化酶/AKT/内皮细胞一氧化氮合成酶信号通路，从而抑制oxLDL-诱导的内皮的氧化应激损伤。　　根据以上发现，我们提出假设，槲皮素可能通过减轻I/R时微血管损伤而保护I/R心肌，而Sirt1的上调参与了槲皮素的该作用。　　研究目的：　　1.观察槲皮素是否具有减轻心肌缺血/再灌注后微血管损伤的作用。　　2.探讨槲皮素是否通过上调Sirt1的表达发挥其减轻心肌缺血/再灌注微血管损伤的作用。　　材料与方法　　实验材料：　　成年雄性SD大鼠，体重250-280g，北京维通利华实验动物技术公司提供。　　试验方法：　　1.建立大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型。　　2.心电图监测各组大鼠不同时期的心率变化，并在实验结束后通过Evans 蓝染色评估结扎位点。　　3. Western blot检测各组Sirt1分子蛋白的表达。　　4. HE染色法和电镜观察槲皮素对缺血/再灌注心肌的微血管形态及组织超微结构的影响。　　5. Elise检测各组大鼠外周血清中内皮损伤标志物和炎症因子的表达情况。　　6. Transwell培养H5V细胞，观察槲皮素对单层内皮细胞通透性的影响。　　结果：　　1.心电图及Evans蓝染色结果显示模型复制成功。　　2. Western blot检测Sirt1分子蛋白表达结果显示，与Sham组相比，I/R组的Sirt1表达水平明显降低；而Que+I/R组的表达水平则比I/R组显著增高，而加入EX527后Sirt1蛋白的表达没有升高。　　3. 槲皮素降低缺血/再灌注损伤心率失常的发生率，加入EX527后槲皮素的该作用被显著减弱。　　3. HE染色法和电镜结果显示心肌缺血/再灌注后，组织形态出现明显变性坏死，广泛水肿及大量炎性细胞浸润，微血管完整性破坏等改变；槲皮素可明显减轻心肌组织的这些病理改变，加入EX527后槲皮素的该作用被减弱。　　4. Elise检测结果显示心肌缺血/再灌注后内皮损伤标志物E选择素和VCAM-1的表达明显增加；促炎因子PAF、IL-1α和IL-6的表达也有明显的增加，槲皮素干预后这些物质的表达有明显的减少，加入EX527后槲皮素的该作用被减弱。　　5. Transwell培养H5V细胞，缺氧/复氧（H/R）诱导内皮细胞损伤，利用大分子荧光标记物FITC-dextran检测单层内皮细胞的通透性。结果显示，H/R引起内皮细胞的通透性增加，而槲皮素干预后，内皮细胞的通透性显著降低，EX527显著抑制了槲皮素的该作用。　　结论：　　1.槲皮素具有减轻心肌缺血/再灌注时微血管损伤的作用。　　2.Sirt1的上调参与了槲皮素减轻微血管损伤的作用机制。