论文部分内容阅读
RRD3是一段从水稻基因组中分离的在单子叶和双子叶植物都具有较高活性的维管组织特异性强启动子，本研究将其与双元载体和细菌人工染色体结合，发展一种能转化大片段DNA并能使目的基因在单子叶和双子叶植物中高水平表达的通用型植物表达双元载体pBCR1。构建的pBCR1主要含有以下元件：1)来源于F因子复制起点和pVS1质粒的rep和sta区段，控制质粒在大肠杆菌与农杆菌中稳定复制，并带有卡那霉素抗性基因作为细菌选择标记；2)带有可切除的来源于pUC19的复制起点ori，当其存在时质粒以松弛型复制，将其切除后质粒才以严紧型复制而维持单拷贝；3)含有T-DNA边界区，可通过农杆菌介导的方式转化植物；左边界带有一个潮霉素抗性基因作为植物选择标记，右边界带有gusA作为报告基因；4)多克隆位点上游带有RRD3通用型启动子，驱动基因在单子叶和双子叶植物中表达。对pBCR1进行初步的功能鉴定，已经证明pBCR1能在E.coli和A.tumefaciens稳定复制并携带外源DNA片段。pBCR1作为高容量的植物表达载体的功能需要进一步研究证明。
从胡萝卜中分离了一段抗冻蛋白基因5’上游序列，已经初步证明其在烟草中具有启动子活性。为了验证这个启动子作为植物表达载体启动子的应用价值，我们对其表达活性、组织特异性和冷诱导性作了进一步的研究。实验结果证明我们所克隆的这段胡萝卜抗冻蛋白基因启动子pafp在烟草中不具有冷诱导性和组织特异性，其平均表达活性比35S约高4倍，是一个组成型表达的强启动子，对植物表达载体的构建具有较高的应用价值。