论文部分内容阅读
本研究分为二部分:
第一部分、Olig2和Hb9在小鼠胚胎脊髓中表达变化
目的:探讨小鼠胚胎脊髓运动神经元在发育与分化过程中碱性-螺旋-环-螺旋转录因子(basic helix-loop-helix,bHLH)Olig2和同源盒基因(Homeobox,Hb9)表达的时空分布情况。有利于了解运动神经元发育和分化的模式,寻找运动神经元数量发育高峰,为下一步分离足量的运动神经元,应用于脊髓运动神经元miRNA芯片打下基础。
方法:选择小鼠的9.5天-13.5天胚胎脊髓,分为E9.5d组、E10.5d组、E11.5d组、E12.5d组、E13.5d组。采用免疫荧光的方法分别检测Olig2和Hb9在这五组胎鼠脊髓中的表达情况,同时应用流式细胞仪分别检测五组胎鼠脊髓Olig2和Hb9表达的阳性率。
结果:免疫荧光染色显示在这五组胎鼠脊髓的腹侧都可见Olig2和Hb9的表达,流式细胞学结果显示E9.5d组Olig2表达的阳性率高于其它四组,差异有统计学意义,(p<0.05),E11.5d组Hb9表达的阳性率高于其它四组,差异有统计学意义(p<0.05)。
结论:Olig2和Hb9在胎鼠脊髓运动神经元细胞的发育过程中起着很重要的作用,运动神经元在E11.5d数量上达到高峰。
第二部分、脊髓运动神经元发育miRNA预测
目的:miRNAs是一类非编码的小RNAs,它通过抑制基因表达的方式调节各种细胞的功能。预测可能参与调控脊髓运动神经元发育的miRNAs,为下一步实验提供理论依据。
方法:采用生物信息学工具(Pictar,Targetscan,Sanger程序)查找已经从小鼠细胞系MN-1中克隆出40种miRNAs的靶基因,利用pubmed检索靶基因的功能,筛选出与运动神经元发育有关的miRNAs。
结果:miR-16,miR-103,miR-19a,miR-23b,miR-27,miR-203,miR-206分别在调节运动神经元发育的基因Hoxc-8,Neurod1,Lhx-4,LIMK1,Islet-1,Pax3有靶位点。
结论:miR-16,miR-103,miR-19a,miR-23b,miR-27,miR-203,miR-206可能参与调节运动神经元发育。