马铃薯细胞壁蛋白基因的克隆及表达

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马铃薯(Solanum tuberosum)在食物安全结构中具有十分重要的地位。我国是马铃薯主要产区之一,马铃薯种植和生产常年来受青枯菌(Ralstonia solanacearum)的严重威胁,是马铃薯丰产稳定的主要限制因子之一。青枯菌是以茄科植物,比如马铃薯、番茄等为寄主的一种革兰氏阴性植物病原菌,是引起作物青枯病的病原菌。~1植物的细胞壁结构是最先感知外界胁迫信号的第一细胞结构。细胞壁蛋白(cell wall proteins,CWP)是存在于植物细胞壁结构中,在植物细胞生在发育、形态建成、病原物感染和环境应答等过程中发挥重要作用,尤其是具有抗逆、抗病、参与植物细胞壁相关的信号转导、胞壁松弛、蛋白酶抑制等多种生物学功能。植物细胞壁蛋白基因已经被证明参与植物防卫反应。目前关于马铃薯细胞壁蛋白基因的研究仅限于其分布及结构的研究,对于其具体的功能鲜有报道。研究马铃薯与青枯菌互作过程中相关的马铃薯细胞壁蛋白的基因表达情况对于理解其可能的抗病功能具有重要的意义。本论文在实验室前期工作的基础上,通过RACE方法在接种青枯菌的抗病基因型ED13中克隆了3个马铃薯细胞壁蛋白基因(NCBI记录号为EU294357、EU294358、EU294359),并对其进行了生物信息学分析,发现三者的氨基酸序列与茄科其他成员的氨基酸序列具有高度的同源性。接种实验结合生物信息学分析,结果表明:(1)青枯菌与马铃薯互作早期能够诱导马铃薯细胞壁蛋白基因的上调表达,推断其在马铃薯与青枯菌互作早期受病菌诱导而且参与碳水化合物代谢过程或细胞内外的信号转导过程。(2)三个CWP受非生物激发子(植物激素)茉莉酸、油菜素内酯和脱落酸的诱导表达均不敏感。(3)原位杂交分析发现CWP基因表达具在组织内表达的差异性不明显,几乎存在于所有感染区段的地上茎组织的维管束系统,包含韧皮部和初生木质部,在茎的表皮、皮层中也检测到一定的杂交信号。(4)三个马铃薯细胞壁蛋白受生物激发子和非生物激发子的诱导上调表达的作用机制还有待于进一步深入研究。与其相互作用的基因和蛋白的探究将在很大程度上拓展我们对于调控马铃薯生长发育的分子机制的认识。我们现有的结果以及下一步更深入的研究有望为马铃薯青枯病抗性的分子机制提供理论基础,对于马铃薯抗病分子育种有一定的意义。
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