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目的:
探讨体外成熟过程中,分别在GV期和MII期冻融对卵母细胞成熟率和超微结构的影响。
方法:
将获得的GV期卵母细胞随机分成A、B 两组,A组是将卵母细胞在GV期慢速程序冷冻-快速解冻后体外培养到MII期;B组是将卵母细胞体外培养到MII期后再慢速程序冷冻-快速解冻。冷冻的程序是从20℃开始以-2℃/min 降至-7℃后人工植冰,再以-0.3℃/min的速度降至-30℃,然后以-50℃/min的速度降至-150℃,最后直接投入液氮中(-196℃)。在光学显微镜下观察两组卵母细胞的形态,并分别计算各组的成熟率和复苏率。选择两组中优质的MII期卵母细胞制作成电镜标本,在透射电镜下观察卵母细胞超微结构的改变。
结果:
B组卵母细胞的成熟率为71.4%,明显高于A组(P<0.025),但A、B两组卵母细胞的复苏率没有显著的差异性(P>0.05)。
A、B两组的卵母细胞透射电镜观察:A组卵母细胞的线粒体散在分布在细胞的胞浆中,部分区域有聚集现象。线粒体大多数明显的肿胀,呈圆形或者椭圆形,内部可见横形肿胀的嵴,部分线粒体的嵴显示不清,线粒体基质为较低密度的轮廓。B组卵母细胞的胞浆内有大量的线粒体和空泡状结构,数量比A组的明显增多,且集中分布在染色体的周围。线粒体周围伴有囊泡,直径0.5-2.0um不等,内含有絮状或纤维状的物质,部分囊泡可见膜性结构包裹。卵母细胞线粒体的周围可见很多肿胀的内质网、囊泡和小管样膜结构复合物,它们之间连接比较紧密。.A组卵母细胞的皮质区皮质颗粒分布不均,部分皮质区域见1-2层排列较整齐的皮质颗粒,在胞浆的其他区域也可见皮质颗粒。B组卵母细胞的不仅皮质区可以看到皮质颗粒,而且在卵周间隙和微绒毛间隙也可见皮质颗粒,总体上数量明显少于A组。A组卵母细胞的胞膜表面可见突向透明带的微绒毛,短粗状,排列稀疏,数量较少。B组卵母细胞的微绒毛数量较A组明显增多,呈细长状,有倒伏的现象。
结论:
在GV期卵母细胞的冻融可对其超微结构造成损伤,这种损伤可能阻碍卵母细胞的成熟过程;和将卵母细胞在GV期冻融后体外培养到MII期相比,将卵母细胞体外培养到MII期后再进行冻融,可能会为临床提供更优质的卵母细胞。