【摘 要】
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血管生成和肿瘤的生长关系密切,通过抑制血管生成抑制肿瘤生长非常有效.我们利用RT-PCR的方法从HepG2细胞内获得了编码人血管抑素的cDNA,将其克隆至毕氏酵母表达载体中.转化
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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血管生成和肿瘤的生长关系密切,通过抑制血管生成抑制肿瘤生长非常有效.我们利用RT-PCR的方法从HepG2细胞内获得了编码人血管抑素的cDNA,将其克隆至毕氏酵母表达载体中.转化毕氏酵母并筛选得到整合多拷贝血管抑素基因的转化子.我们证实了α交配因子的信号肽分泌蛋白的效果优于PHO1信号肽,目标基因的多拷贝整合有利于蛋白的表达.发酵表达血管抑素的表达量达73mg/L,利用赖氨酸亲和柱纯化重组蛋白.我们利用RT-PCR从人胎盘组织中得到编码肝细胞生长因子第一个圆饼结构(HGFK1)的cDNA.克隆入大肠杆菌表达载体中胞内的表达,经纯化、复性后,证实HGFK1能以剂量依赖的方式特异地抑制碱性成纤维生长因子刺激的牛主动脉内皮细胞的增殖.ED<,50>约为0.7ug/mL.我们将HGFK1基因克隆入真核表达载体pCDNA3中,转染肝癌细胞株BEL7404,得到稳定表达HGFK1的细胞株.该细胞株在裸鼠皮下的生长速度慢于转当空白质粒的细胞株.
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