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Tristetraprolin(TTP)是 TPA-induced sequence 11(TIS11)家族中的一员,以两个串联的Cys-Cys-Cys-His(CCCH)锌指结构域为特征,是CCCH型锌指家族蛋白质的原型。TTP 通过与 mRNA3’非翻译区(3’untranslatedregion,3’UTR)的 AU 富集区(AU-rich elements,AREs)结合,加速去除多聚腺苷酸(poly(A))尾巴,在转录后调控中发挥重要作用,是目前研究最为深入的ARE结合蛋白之一。然而,TTP在哺乳动物卵母细胞发育成熟过程中的作用及机制目前还一无所知。本研究以小鼠卵母细胞为材料,通过显微注射siRNA体外敲低TTP蛋白(TTP knockdown,TTP-KD),我们发现卵母细胞的成熟进程和胞质分裂异常。进一步利用免疫荧光染色、染色体延展及激光共聚焦扫描等技术探讨TTP在小鼠卵母细胞成熟过程中对细胞骨架组装的作用。此外,我们通过构建条件性敲除(Conditional knockout,cKO)TTP小鼠模型初步探讨了 TTP在卵母细胞发育过程中的作用。1TTP在小鼠卵母细胞体外成熟过程中的作用本试验首先通过免疫荧光染色的方法研究了 TTP在小鼠卵母细胞成熟过程中不同时期的定位,结果显示TTP在生发泡(germinal vesicle,GV)期定位于细胞核中。随着减数分裂的恢复,直到第二次减数分裂中期(Metaphase Ⅱ,MⅡ),TTP的分布均与染色体共定位。进一步探讨了 TTP敲低对卵母细胞成熟的影响,通过显微注射TTP特异siRNA后,我们发现卵母细胞成熟进程及胞质分裂出现异常,第一极体(firstpolar body,Pb1)排出率显著降低(P<0.05)。此外,共聚焦扫描结果显示TTP表达量降低对减数分裂过程中皮质区微丝帽的形成产生显著影响,纺锤体组装和染色体排列的异常率都显著增加(P<0.05)。与此同时,核型分析结果显示TTP的敲低使得卵母细胞染色体非整倍体率也急剧升高。以上试验结果表明TTP在小鼠卵母细胞成熟过程中对肌动蛋白的聚合、纺锤体的组装以及染色体的排列都发挥了重要作用。2条件性敲除TTP对小鼠卵母细胞发育的影响在明确体外条件下TTP对小鼠卵母细胞成熟的作用后,我们进一步探讨了体内条件下TTP对卵母细胞发育过程的作用。本试验利用Cre-LoxP系统获得卵母细胞特异性敲除TTP小鼠TTPf/fZP3Cre+,并检测TTP对雌性小鼠生育力的影响。结果显示TTPf/f ZP3Cre+小鼠与野生型(widetype,WT)小鼠生育力没有显著差异。目前,我们正在构建TTPf/f VasaCre+小鼠来进一步确定TTP在小鼠卵母细胞体内发育过程中的作用。