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研究背景诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起人群非细菌性急性胃肠炎的主要病原体之一。全球预计有55%-85%与NoVs相关的暴发由GⅡ.4引起。双壳贝类被公认为是引起食源性暴发的高风险食品,其中与牡蛎相关的暴发报道最多。广东省海产养殖业发达,项目组前期研究发现广东省汕尾市长沙湾牡蛎养殖区的牡蛎NoVs污染率较高。然而,该养殖区人群急性胃肠炎发病率为0.10次/人年,低于广东省平均水平0.25次/人年,也低于全国人群急性胃肠炎发病率0.56次/人年。该养殖区急性胃肠炎病人NoVs感染阳性率为20%。在一项针对该地区健康人群NoVs隐性感染的调查显示总人群NoVs隐性感染率为4.04%,其中牡蛎养殖区人群NoVs隐性感染率约为6.30%。该养殖区人群普遍有常年生食贝类海产品的习惯,暴露于NoVs机会相对较多,却很少发生人群NoVs急性胃肠炎暴发和流行。生活在牡蛎养殖区NoVs高污染环境中,又有特殊的高危饮食习惯,该地区居民的急性胃肠炎发病率并不比一般人群高,这其中是否存在某些保护机制使宿主不易发病,值得探索和研究。人体感染NoVs主要与宿主遗传和免疫、环境和病原体三方面因素相关。大量研究表明人体感染NoVs与人类组织血型抗原(Human histo-blood group antigen,HBGA)受体密切相关。HBGA是红细胞、呼吸道、泌尿生殖道和消化道粘膜上皮细胞表面的一类复杂的碳水化合物,存在于唾液、血液、母乳和肠道等体液中。研究还发现人体内血清特异性NoVs抗体的存在可以阻断NoVs病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)与HBGA的结合,保护机体免受感染,降低疾病发生的风险。牡蛎养殖区人群血清NoVs感染的特异性抗体水平如何?血清抗体是否存在较普通人群具有更高阻断NoVs与HBGA受体结合的能力?本研究从人群职业和特殊饮食情况、HBGA受体分布以及血清抗体水平三个方面探究暴露于NoVs感染高风险的牡蛎养殖区人群较少发生NoVs急性胃肠炎暴发和流行的可能因素。研究方法本研究选取了牡蛎养殖区沿岸A镇1个村落和B镇1个居委会作为调查点,以18岁及以上常住人口作为调查对象,针对其特殊的职业以及饮食习惯设计调查问卷,同步收集血液和唾液标本。同时匹配年龄和性别,从广东省内陆地区抽取对照人群血清标本作为对照。利用成熟的大肠杆菌BL21(DE3)原核表达系统表达NoV GⅡ.4 VA387 P颗粒和GⅡ.17 P蛋白作为替代抗原,用间接ELISA试验测定NoV GⅡ.17流行株血清特异性抗体水平;通过ELISA试验测定养殖区人群唾液HBGA受体表型;用体外阻断实验作为体外中和替代模型测定人群血清抗体阻断NoV GⅡ.4与HBGA受体结合的效率,分析牡蛎养殖区人群NoVs感染与HBGA受体阻断之间的关系。结果1.有195人参与问卷调查及采样(血液,唾液),平均年龄50.7岁;男性70人,女性125人。A镇调查人群年龄分布均数大于B镇,差异具有统计学意义(F=9.28,P=0.003)。B镇调查的女性人数占比高于A镇,A、B镇之间男女性别比较差异具有统计学意义(χ2=5.452,P=0.02)。人群中有生食腌蚝特殊饮食习惯,且食用频率每月≥1次的人占比24.6%(48/195)。从事与牡蛎养殖/加工职业有74人,占比37.9%(74/195),两镇职业人群之间比较差异具有统计学意义(χ2=118.039,P<0.001)。2.SDS-PAGE电泳得到相对分子量为36kDa NoV GⅡ.4 VA387 P颗粒和60kDa NoVGⅡ.17P蛋白,大小与预计大小相符。3.牡蛎养殖区人群NoV GⅡ.17血清抗体总阳性率为88.2%(172/195)。从事养殖/加工职业人群血清抗体阳性率为93.2%,非养殖/加工职业人群血清抗体阳性率为81.8%,差异比较具有统计学意义(χ2=5.025,P=0.025)。有生食腌蚝特殊饮食习惯与无生食腌蚝特殊饮食习惯人群NoV GⅡ.17血清抗体阳性率之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.195份唾液HBGA受体表型鉴定结果分泌型受体有168人,其中A型有43人,B型有41人,0型有80人,AB型4人,非分泌型27人。分泌型受体占比86.2%(168/195),与中国普通人群唾液HBGA分泌型受体比例一致。5.牡蛎养殖区人群血清抗体阻断效率达到50%(BT50)比例有136人,占比69.7%(136/195),血清抗体滴度平均水平为1:212.30;内陆对照人群血清抗体阻断效率达到50%(BT50)比例有106人,占比62.7%(106/169),血清抗体滴度平均水平为1:99.09。两个地区人群血清抗体阻断效率达到50%比例之间比较差异虽无统计学意义(P>0.05),但两个地区人群血清抗体滴度的总体中位数比较,差异有统计学意义(z=6.235,P<0.001),牡蛎养殖区人群血清阻断作用抗体滴度高于内陆对照人群。结论1.成功表达NoV GⅡ.4 VA387 P颗粒和NoV GⅡ.17 P蛋白。2.在2015年1月NoV GⅡ.17新型变异株流行的早期,牡蛎养殖区人群血清里就已检出比内陆普通人群高的NoV GⅡ.17 IgG抗体阳性率,表明该养殖区人群确实存在更多暴露和感染No Vs的机会。当地虽然有较高感染NoVs风险的特殊饮食习惯,对NoVGⅡ.17也有普遍感染,但主要与从事牡蛎养殖或加工职业相关,职业暴露很可能是当地人群NoVs感染的主要途径。3.牡蛎养殖区人群唾液HBGA分泌型受体分布比例与国内其他地区人群受体分布相一致,从宿主遗传因素上排除了对NoVs不易感的先天因素。4.牡蛎养殖区人群血清阻断作用的抗体滴度高于内陆对照人群,表明牡蛎养殖区人群血清抗体阻断能力要强于普通人群,提示牡蛎养殖区人群较普通人群对NoV GⅡ.4感染更有免疫阻断能力。