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本文通过对鸡肠上皮细胞(IEC)的分离和原代培养建立IEC细胞系，比较酶对细胞的消化和增殖影响，促进细胞增殖的最适血清浓度，CO2浓度和温度。然后以IEC细胞系为实验模型，研究载铜硅酸盐纳米微粒(CSN)对鸡IEC形态、增殖、分化及损伤后细胞迁移的影响。
研究方法：1.采用不同的消化酶体外分离鸡IEC，并培养。2.IEC生长、增殖检测采用MTT法和细胞计数法。3.用倒置显微镜、透射电镜观察IEC生长状态、形态。4.IEC鉴定用碱性磷酸酶和H-E染色法。
研究结果：1.用300U/mLⅪ型胶原酶和0.1mg/mLⅠ型中性蛋白酶在37℃下联合消化40min，经离心可收集到大量的细胞。在倒置显微镜下观察，其粘膜悬液主要由隐窝样上皮细胞团组成，细胞呈球性或卵石状，边界清楚，胞浆丰富，核为圆形或卵石状，核内染色质稀疏空亮，核仁1～2个。2.在含2.5～5.0％胎牛血清的DMEM培养基中，39℃，5～7.5％CO2下培养，一定时间后，在透射电镜下，可观察到细胞具有典型的肠上皮隐窝细胞特征，IEC表面有大量的微绒毛，细胞贴壁短期内细胞间的紧密连接，桥粒等，细胞内含有丰富的线粒体和内质网等。IEC在1～2d贴壁，6～7d明显增殖，10～12d汇合成片，细胞呈多角形单层生长。3.本试验用碱性磷酸酶作标记物进行免疫酶染色，结果显示，分离的细胞培养至第7天时，(91.16±6.97)％细胞呈蓝黑色反应。4.与对照组相比，添加30μg/mL或50μg/mLCSN后细胞形态未发生变化，在第10天时，细胞表面的微绒毛比未加CSN的更加明显；添加CSN培养孔中细胞的增殖更加明显，该孔细胞在第10天时已完全汇合成片，而未添加孔细胞在第10天时还有未完全汇合区域；CSN可使单位面积里迁移细胞的数量显著增多(P＜0.05)，能促进损伤后细胞的快速修复。
研究结论：1.确定了用300U/mL胶原酶Ⅺ和0.1mg/mLⅠ型中性蛋白酶联合消化法为较好的细胞分离方法，含2.5％～5％FCS为较适宜的血清浓度，39℃和5％～7.5％CO2为较好的培养条件。鸡IEC经显微镜和组织化学鉴定，所培养细胞主要为IEC。2.在鸡IEC原代培养中添加30μg/mL、50μg/mLCSN，能促进IEC的增殖、分化及损伤细胞的修复。