论文部分内容阅读
目的:观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在戊四氮(PTZ)诱导的以发育期大鼠癫痫持续状态(SE)后海马区的表达,探讨HIF-1α与海马内神经干细胞(NSCs)增殖的关系。
方法:首先,以出生后7天(P7)、P14、P21、P28四个日龄组SD大鼠为研究对象,随机分成模型组(SE组)及生理盐水对照组(NS组),腹腔注射PTZ诱导建立SE模型;通过RT-PCR、免疫组化方法分别检测SE发作后一周内不同时间点海马区HIF-1α mRNA的表达及其蛋白的分布;其次,以P21大鼠为研究对象,随机分成反义寡聚核苷酸侧(ASODN侧)、生理盐水侧(NS侧)和非干预组,在海马齿状回(DG)区微量注射HIF-1α反义寡聚核苷酸或NS建立干预模型后诱导SE发作,通过RT-PCR、免疫组化方法分别检测SE发作后海马区HIF-1α mRNA的表达以及相同时间点HIF-1α蛋白和nestin蛋白的分布。
结果:
1.各日龄组大鼠SE发作后海马区HIF-1α mRNA的表达明显升高,表达趋势基本相似,呈现一个典型的双峰表达曲线(P＜0.05),并且不同的日龄组表达水平则随日龄增大有下降趋势;比较各日龄组SE发作后6h表达峰值有显著差异(P＜0.05)。
2.各日龄组大鼠SE发作后各时间点海马区HIF-1α表达明显,NS组仅弱表达,并且具有时间特点,在SE发作后1d时,HIF-1α阳性细胞仅分布在SVZ区(在P7组大鼠则分布于SVZ区和海马CA3区),3d时多见于海马CA2、CA3、DG各区多形层,7d时则出现在相应区域的椎体细胞层,分子层及周边皮质区,3d海马区分布最多(P＜0.05)。其中,P7组大鼠NS组各时间点阳性细胞明显多于P28组(P＜0.05),并且随时间点不同变化趋势不明显。SE发作后,P7组大鼠海马区HIF-1α阳性细胞增加不明显,P28组大鼠则在SE发作后3d时表达明显增强(P＜0.05)。
3.反义寡聚核苷酸干预后,P21鼠SE发作后2天(P21S2D)时海马区HIF-1αmRNA的表达水平明显低于非干预组和NS侧(P＜0.05)。而P21S7D时HIF-1α阳性细胞分布于NS侧和ASODN侧海马各区(下托、CA2、CA3)以及周边皮质区(压部后无颗粒皮质,RSA),形态多样,胞浆和(或)胞核深褐色染色均可见,多集中于海马CA2、CA3、CA4区多形层、椎体细胞层、透明辐射层、齿状回区颗粒细胞层和海马周边皮质微量注射针进针部位。NS侧,HIF-1α阳性细胞计数皮质区多,海马区少:ASODN侧分布则相反;与非干预鼠海马区HIF-1α阳性细胞计数比较,NS侧阳性细胞数量明显减少(P＜0.05),ASODN侧HIF-1α阳性细胞数量稍增多,差异不显著;NS侧和ASODN侧的阳性细胞数量则明显不同(P＜0.01)。
4.干预试验中,P21鼠腹腔注射NS后7天(P21NS7D)、腹腔注射PTZ致SE发作后7天(P21S7D)和P21S14D三组大鼠脑区nestin阳性细胞分布于NS侧和ASODN侧海马各区(下托、CA1、CA2、CA3、DG、海马裂)以及周边皮质;呈轴突丝状深褐色染色,集中分布于CA2、CA3、CA4区透明辐射层、齿状回区颗粒细胞层和周边皮质。P2lS7D、P21S14D组NS侧海马区nestin阳性细胞计数显著多于ASODN侧(P＜0.01),尤以进针部位CA1、CA2、海马裂、DG区差异明显。而三组各自NS侧与ASODN侧比较,皮质区nestin阳性细胞计数差异不显著,P21S7D、P21S14D组海马区nestin阳性细胞计数差异显著(P＜0.05)。
结论:
1.发育期各日龄组大鼠SE发作后海马区HIF-1α mRNA及其蛋白的表达增强,有年龄相关性;
2.SE发作后HIF-1α的表达和NSCs增殖有关,可能是通过靶基因间接促进NSCs增殖。