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本文基于RAPD和AFLP技术,开展了设施专用黄瓜新品种‘春玉’和‘沪2’的指纹图谱构建与分析研究,筛选出‘春玉’的RAPD和AFLP特异性条带及‘沪2’AFLP特异带,为新品种专利保护提供了分子证据。同时,采用RAPD、ISSR和AFLP三种分子标记,对10份不同生态型的黄瓜材料进行了遗传多样性分析,为黄瓜育种实践提供了有益信息。主要研究结果有: 1.黄瓜品种‘春玉’RAPD指纹图谱的构建 从300条RAPD随机引物中筛选出能稳定扩增的26个引物,对‘春玉’等21份材料进行了扩增。26个引物共在173个位点扩增出条带,多态性位点80个,多态性比例为46.24%,谱带大小在100~1500bp之间。‘春玉’在引物E13约400bp处出现特异缺失条带,可作为春玉的特征性指纹图谱。选用不同的引物进行组合(AJ15,X1,X3,E6)可以鉴别出所有供试材料。同时应用MEGA软件,根据RAPD标记相似系数,进行UPGMA聚类分析,将参试材料在相似系数0.676处分为3个组群,聚类结果与生态学分类基本一致。 2.黄瓜品种遗传差异的AFLP分析 采用AFLP技术,从32对引物中筛选出5对带型分布均匀、多态性丰富且分辨能力强的引物(E+TA/M+CTC、E+TC/M+CTA、E+TT/M+CTG、E+AG/M+CAT、E+AG/M+CAG),对两个新育成的设施专用黄瓜品种‘春玉’和‘沪2’的AFLP指纹图谱进行比较分析。5对引物共在282个位点上扩增出条带,多态性位点21个,占总扩增位点7.45%。计算出两品种的遗传相似值为0.926,遗传距离为0.074,说明两者虽然亲缘关系较近,但仍具有一定的遗传差异,从而能够在分子水平上区分这两个黄瓜品种。这对应用AFLP技术鉴定亲缘关系较近、形态特征相似的黄瓜品种提供了依据。 3.黄瓜ISSR-PCR体系的优化 对黄瓜ISSR扩增体系中的Mg2+浓度、dNTPs浓度和Taq酶浓度三个关键因素进