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目的:1.改良人子宫肌瘤原代细胞的培养方法,提高人子宫肌瘤原代细胞的贴壁率,缩短首次传代的时间。2.探讨EGCG对人子宫肌瘤细胞增殖凋亡的影响,以及对经典Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt5b、β-catenin、EGFR的表达影响,以期阐明绿茶多酚治疗子宫肌瘤的作用机制,从而丰富中医食疗临床适用范围。方法:1.在手术取下肌瘤组织后放入4℃Hanks液中,延长细胞消化时间,组织块二次消化等改良方法获取原代子宫肌瘤细胞。2.绿茶多酚OuM、50uM、100uM、200uM干预子宫肌瘤细胞24h、48h、72h后,采用CCK8法检测ECGC对人子宫肌瘤细胞生长的影响,FCM检测细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察EGCG(0、50、100、200uM)处理24h、48h、72h后细胞的形态学变化。免疫组织化学法检测Wnt5b、β-catenin在各组子宫肌瘤细胞表达情况;采用Western-blot检测法检测细胞Wntb、β-catenin、EGFR的表达。成果:1.人子宫肌瘤有限细胞系培养成功.2.改良方法优于常规组:细胞获取量(2.33±0.48 VS 1.16±0.29)×108个/L,细胞贴壁率(41.33±7.43VS 22.07±6.82)%;首次传代时间(10.27±1.67VS14.67±1.18)天,P值均小于0.05;传代次数(6.60±0.83VS6.33±0.72)次,P>0.05;冻存后复苏成功率均为100%,无明显差异。显微镜下细胞显典型的"峰-谷"状生长,胞浆内表达SMα-actin),细胞纯度达98%以上。3.各组子宫肌瘤细胞的体外生长曲线形态良好,倒置显微镜下可见对照组的人子宫肌瘤细胞呈梭形或多边形贴壁生长,数量密集,轮廓清楚,细胞间连接紧密。CCK-8结果显示,与对照组相比,EGCG以剂量-时间依赖性的方式抑制子宫肌瘤细胞的增殖。加药组作用24小时即出现抑制率(P<0.05),随着作用时间的延长,抑制率增加。4.FCM结果显示,人子宫肌瘤细胞的凋亡率随着EGCG浓度的增加而升高。5..组织免疫化学法、Western-blot检测结果显示:EGCG能降低人子宫肌瘤细胞中Wnt5b蛋白、β-catenin蛋白的表达,且呈浓度依赖关系。结论:1.改良后的细胞培养技术可以较快获得较多数量的人原代子宫肌瘤细胞。2.EGCG可抑制经典Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt5b、β-catenin、EGFR的表达促使人子宫肌瘤细胞的凋亡。