琼脂糖的疏水化及用于组织工程支架研究

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琼脂糖作为一种来源广泛而且生物相容性好的天然高分子材料,在生物材料的研究中占据重要的地位,但是琼脂糖含有多羟基,亲水性强,只能溶于热水和少量的有机溶剂,不利于加工,这在一定程度上限制了琼脂糖在生物医学工程领域的应用。因此对琼脂糖分子结构中的羟基进行疏水化改性,提高其在有机溶剂中的溶解性,使材料更容易构建高孔隙率的多孔支架材料,对于拓宽琼脂糖在组织工程中的应用具有重要意义。目的:琼脂糖疏水化改性后构建组织工程支架。方法:采用乙酰化法,吡啶作为溶剂和催化剂,醋酸酐为反应物,制备两种不同取代度的琼脂糖醋酸酯;利用化学滴定法测琼脂糖醋酸酯的取代度;黏度法表征琼脂糖和琼脂糖醋酸酯的分子量;通过FT-IR、13C-NMR对改性前后的材料结构进行表征;原子力显微镜(AFM)观察膜表面形貌;对琼脂糖醋酸酯膜进行细胞粘附试验,表征材料的生物相容性;22周体内降解试验评价琼脂糖醋酸酯的降解性能及其组织相容性。将改性后的琼脂糖醋酸酯进行静电纺丝制备纳米纤维膜,并优化电纺丝条件;采用溶胀性试验、含水率的测试表征纳米纤维的性能。采用致孔剂法制备琼脂糖醋酸酯多孔支架材料,并通过SEM表征其表面形貌;动物体内骨修复试验评价材料在支架领域的应用,对修复部位的组织进行HE染色分析。结果:通过调节酯化反应过程中的反应条件制得两种不同取代度的琼脂糖醋酸酯。化学滴定方法测得两种琼脂糖醋酸酯的取代度分别为2.67和3.75。黏度法测得琼脂糖和琼脂糖醋酸酯的分子量均为20万左右。FT-IR、13C-NMR表征改性产物的结构,结果表明琼脂糖成功乙酰化。原子力显微镜(AFM)结果表明疏水改性材料表面呈球粒状结构,且随着取代度的增大,表面的球粒粒径增大,粗糙度增大。细胞粘附试验表明,琼脂糖醋酸酯能够促进细胞的粘附增殖。体内降解试验表明DS2.67琼脂糖醋酸酯植入皮下后炎症反应随着时间的延长逐步减弱,而DS3.75琼脂糖醋酸酯则呈现相反的趋势,总体降解速度较慢。对材料降解性的评价结果显示DS2.67琼脂糖醋酸酯的降解性略低于DS3.75琼脂糖醋酸酯。通过条件优化得到电纺的较优条件为:丙酮和N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)的比例为2:1、浓度为5%。纳米纤维在生理盐水中几乎不溶胀,可较好地保持原有形态。纤维的含水率结果显示,纤维膜的含水率与疏水化产物的取代度成反比。致孔剂法制得三维多孔支架材料,SEM结果显示材料呈多孔结构,且孔洞相互贯通,孔隙率为90%左右。体内植入试验表明琼脂糖醋酸酯具有良好的生物相容性。研究表明,琼脂糖醋酸酯可望用于骨组织再生等降解速度慢的工程支架。
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