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目的:干扰素(Interferon)是一类重要的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,MCF-7乳腺癌细胞对干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)诱导的Fas/FasL途径介导的凋亡抵抗(2000U/ml),即使干扰素-γ浓度增加到20000U/ml,它对MCF-7乳腺癌细胞仍旧不起作用。本实验探讨研究干扰素-α2b(Interferon-α2b,IFN-α2b)逆转MCF-7乳腺癌细胞对干扰素-γ诱导的Fas/FasL途径介导的凋亡的抵抗作用。方法:1.细胞选用MCF-7乳腺癌细胞,作用培养时间分别为24h、48h、72h。2.实验分组:实验分为对照组和实验组。凋亡诱导实验:实验组1为500U/mlIFN-α2b作用组,实验组2为500U/mlIFN-γ作用组,实验组3为500U/mlIFN-α2b和500U/mlIFN-γ联合作用组。对照组即正常培养的MCF-7乳腺癌细胞。FasL封闭实验:对照组1即正常培养的MCF-7乳腺癌细胞,对照组2为500U/mlIFN-α2b和500U/mlIFN-γ联合作用组,实验组即经FasL抗体封闭的MCF-7乳腺癌细胞再经500U/mlIFN-α2b和500U/mlIFN-γ联合作用,时间为72h。3.处理:凋亡诱导实验:对照组和实验组细胞在处理培养24h、48h、72h后用倒置显微镜观察各组细胞的生长状况及形态学改变并照相,通过流式细胞仪(FCM)用AnnexinV-EGFP染色检测细胞凋亡情况、亚倍体峰检测PI染色的细胞凋亡情况,MTT检测细胞增殖抑制情况,用流式细胞技术检测MCF-7乳腺癌细胞Fas/FasL蛋白表达情况。FasL封闭实验:FasL抗体封闭实验组MCF-7乳腺癌细胞FasL蛋白,对照组和实验组在添加相同作用因素以后继续培养72h通过流式细胞仪(FCM)用AnnexinV-EGFP染色检测细胞凋亡情况、亚倍体峰检测PI染色的细胞凋亡情况。4.统计分析:所有数据资料以均数±标准差( x±S)表示。采用SPSS11.5统计学软件进行统计处理,进行析因设计方差分析,两两比较用Tukey或Dunnett t检验,(P<0.05)表示统计学差异明显。结果:1.凋亡诱导实验:流式细胞仪检测Annexin V-EGFP染色的细胞凋亡情况:在作用24h后,实验组1、实验组2、实验组3的凋亡细胞百分率分别为2.39%、2.35%、2.95%,在作用48h后实验组1、实验组2、实验组3的凋亡细胞百分率分别为2.29%、1.93%、2.00%,在作用72h后实验组1、实验组2、实验组3的凋亡细胞百分率分别为4.02%、2.25%、5.33%,在作用24h、48h、72h后对照组的凋亡细胞百分率分别为2.11%、1.82%、2.27%。在相同作用时间内,在作用24h和48h时,各组间相比差异不明显,无统计学意义(P>0.05),在作用72h时,实验组3分别与对照组、实验组2比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05);相同的作用因素,干扰素-α2b作用于细胞,作用72h与作用24h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),干扰素-γ作用于细胞,各个作用时间相比,差异不明显,均无统计学意义(P>0.05),干扰素-α2b联合干扰素-γ作用于细胞,作用72h分别与作用48h、24h相比,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪通过亚倍体峰检测PI染色细胞凋亡情况:在作用24h后,实验组1、实验组2、实验组3的凋亡细胞百分率分别为1.73%、2.06%、1.64%,在作用48h后实验组1、实验组2、实验组3的凋亡细胞百分率分别为2.04%、4.08%、7.02%,在作用72h后实验组1、实验组2、实验组3的凋亡细胞百分率分别为3.32%、6.76%、28.61%,经作用24h、48h、72h后对照组的凋亡细胞百分率分别为1.51%、1.80%、3.09%。在相同作用时间内,在作用24h时,各组间相比差异不明显,无统计学意义(P>0.05),在作用48h时,实验组3分别与对照组、实验组2比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),在作用72h时,实验组3、实验组2分别与对照组、实验组1比较以及实验组3与实验组2比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05);相同的作用因素,干扰素-α2b作用于细胞,作用72h分别与作用48h、24h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),干扰素-γ作用于细胞,作用72h与作用24h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),干扰素-α2b联合干扰素-γ作用于细胞,各个作用时间相比,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。MTT法测定处理后MCF-7乳腺癌细胞增殖的抑制情况:在作用24h后,实验组1、实验组2、实验组3的OD值分别为0.92、1.08、1.01,在作用48h后实验组1、实验组2、实验组3的OD值分别为0.69、0.81、0.69,在作用72h后实验组1、实验组2、实验组3的OD值分别为0.91、1.09、0.38,在作用24h、48h、72h后对照组细胞的OD值均为1.00。在作用24h时,实验组2与实验组1比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),在作用48h时,实验组3、实验组1分别与对照组比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),在作用72h时,实验组3与其它各组间比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),其它各组间相比,差异不明显,均无统计学意义(P>0.05);相同的作用因素,干扰素-α2b作用于细胞,作用48h分别与作用72h、24h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),干扰素-γ作用于细胞,作用48h分别与作用72h、24h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),干扰素-α2b联合干扰素-γ作用于细胞,各个作用时间相比,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测Fas/FasL蛋白表达情况:在作用24h后,实验组1、实验组2、实验组3的FasL蛋白表达百分率分别为4.09%、2.76%、3.89%,在作用48h后实验组1、实验组2、实验组3的FasL蛋白表达百分率分别为3.63%、1.25%、1.20%,在作用72h后实验组1、实验组2实验组3的FasL蛋白表达百分率分别为7.21%、2.91%、7.23%,在作用24h、48h、72h的对照组的FasL蛋白表达百分率分别为2.30%、1.42%、2.43%。在相同培养时间内,在作用24h时,各组间比较,差异不明显,无统计学意义(P>0.05),在作用72h时,实验组1、实验组3分别与对照组、实验组2比较,差异明显,有统计学意义(P<0.05);相同的作用因素,干扰素-α2b作用于细胞,作用72h分别与作用48h、24h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05),干扰素-α2b联合干扰素-γ作用于细胞,作用72h与作用48h比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。在作用24h后,实验组1、实验组2、实验组3的Fas蛋白表达百分率分别为82.54%、86.62%、96.00%,在作用48h后实验组1、实验组2、实验组3的Fas蛋白表达百分率分别为95.35%、96.36%、96.45%,在作用72h后实验组1、实验组2、实验组3的Fas蛋白表达百分率分别为89.11%、93.93%、82.62%,在作用24h、48h、72h后对照组的Fas蛋白表达百分率分别为80.16%、98.92%、96.84%。在相同的作用时间内,各组间相比差异均不明显,无统计学意义(P>0.05)。2.FasL封闭实验:流式细胞仪检测AnnexinV-EGFP染色的抗体封闭后的细胞凋亡情况:经处理后实验组凋亡细胞百分率为7.15%,对照组1凋亡细胞百分率为3.48%,对照组2凋亡细胞百分率为10.89%,各组间比较,差异明显有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪通过亚倍体峰检测抗体封闭后的PI染色的细胞凋亡情况:经处理后实验组凋亡细胞百分率为9.11%,对照组1凋亡细胞百分率为3.55%,对照组2凋亡细胞百分率为27.65%,各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:干扰素-α2b可逆转MCF-7乳腺癌细胞对干扰素-γ诱导的Fas/FasL途径介导的凋亡的抵抗,作用机制可能与增加Fas/FasL通路敏感性,上调肿瘤细胞FasL蛋白表达,加强Fas/FasL之间的交联有关,还可能与干扰素-α2b提高肿瘤细胞内干扰素-γ药物浓度或增加肿瘤细胞对它的敏感性有关。