本论文来自于江苏省高校自然科学重大基础研究资助项目“四物汤类方治疗妇科血瘀证的物质基础和配伍机理研究”。香附四物汤是四物汤的重要衍化方之一，临床主要用于气滞血瘀证原发性痛经的治疗。本论文首先对香附四物汤的效应物质进行了初步筛选，采用缩宫素诱导的小鼠离体子宫模型筛选香附四物汤治疗妇科血瘀证痛经的活性部位，结果显示挥发油等部位的活性显著。本论文主要对香附四物汤挥发油部位开展相关研究；此外，对香附四物汤的重要组方药味—香附进行了质量评价研究。　　 一、香附四物汤治疗妇科血瘀证痛经的活性部位筛选　　 采用缩宫素诱导的小鼠离体子宫模型筛选香附四物汤治疗妇科血瘀证痛经的活性部位。结果表明：挥发油部位(xf-1)、醇沉后上清液(xf-5)、60％乙醇洗脱液(xf-13)、70％乙醇洗脱液(xf-14)对小鼠离体子宫的收缩幅度和平均肌张力具有非常显著的抑制作用，因此，挥发油部位等可能是香附四物汤的治疗妇科血瘀证的重要活性部位。　　 为了寻找香附四物汤挥发油的活性来源及其与基本方的活性差异，进一步对四物汤挥发油、香附四物汤挥发油、组方药咪挥发油及香附四物汤挥发油主要成分藁本内酯的抑制小鼠离体子宫收缩活性进行比较。结果：香附四物汤挥发油对小鼠离体子宫的收缩幅度和平均肌张力具有非常显著抑制作用；四物汤挥发油对小鼠离体子宫的收缩频率具有显著抑制作用；组方药味当归、川芎挥发油对小鼠离体子宫的收缩频率和幅度具有显著抑制作用，而香附和木香挥发油对频率、幅度和平均肌张力具有显著抑制作用；藁本内酯对小鼠离体子宫的收缩频率和平均肌张力有显著抑制作用。结论：香附四物汤挥发油部位具有显著抑制子宫平滑肌收缩的效应，香附四物汤挥发油活性优于四物汤及各组方药味挥发油，其中作为行气、止痛、调经常用药味香附、木香挥发油抑制小鼠离体子宫收缩的活性显著，可能是香附四物汤治疗气滞血瘀证痛经的重要配方药味；藁本内酯可能是香附四物汤挥发油中的重要活性成分之一。　　 二、香附四物汤及组方药味挥发油的GC-MS分析　　 采用GC-MS联用技术鉴定了香附四物汤挥发油中35个主要化合物，已鉴定成分占挥发油总量的86.61％。其中主要成分有：藁本内酯(42.39％)，β-芹子烯(4.49％)，α-香附酮(4.33％)，β-香附酮(2.57％)，香附烯(1.87％)，丁烯基酜内酯(3.40％)，1，3-环辛二烯(3.75％)，去氢木香内酯(1.92％)等。同时鉴定了四物汤挥发油中的29个主要化合物，约占挥发油总量的72.90％；鉴定了当归药材挥发油中的30个主要化合物，占当归挥发油总量的72.90％；鉴定川芎挥发油中36个组分，占川芎挥发油总量的78.30％；鉴定香附挥发油中28个组分，占香附挥发油总量的89.42％；鉴定木香挥发油中35个组分，占挥发油总量的69.54％。四物汤、香附四物汤挥发油GC-MS总离子流图的化学信号主要源于当归、川芎药材。香附四物汤挥发油中对应于香附、木香药材挥发性成分的信号数及强度均不及在各自药材挥发油中的表现，可能是由于组方配比用量降低了香附和木香药材挥发油的化学成分信号，或由于复方提取时部分成分的蒸馏效率降低，或发生成分转化。　　 通过对比香附四物汤与组方药材挥发油的化学成分组成，发现复方中基本保留了单味药材的主要成分，但也并非简单相加，在成分种类和相对含量上存在差异。如复方挥发油中检测到的菠菜烯(Squalene)在单味药材挥发油中未检出，为复方配伍后新出现的成分；而单味药材挥发油中含有的正十四烷(Tetradecane)，十六烷酸(Hexadecanoic acid)，氧化石竹烯(Caryophyllene oxide)、诺卡酮(Nootkatone)、7-甲基-3，4-辛二烯(7-Methyl-3，4-octadiene)、香柠檬醇(Bergamotol)、α-姜黄烯(α-Curcumene)等成分在复方挥发油中消失。以上结果说明了香附四物汤各配方药味组成复方作为整体提取时，提出的挥发油会有新成分产生也有部分成分的含量降低，甚至未检测出。　　 三、香附四物汤挥发性成分与子宫平滑肌收缩效应的相关性分析　　 采用主成分分析(PCA)法，对香附四物汤及组方药材挥发油中含量高于1％的化学成分(53个)与抑制小鼠离体子宫收缩的生物效应建立多变量数学模型，对其相关性进行分析。结果：PCA分析表明有21个化学成分对活性贡献率较大，其中对四物汤挥发油活性贡献率较大的成分主要有：Z-藁本内酯(Z-Ligustilide)、顺式罗勒烯(cis-Ocimene)、γ-芹子烯(γ-Selinene)、匙叶桉油烯醇(Spathulenol)、3-丁烯基苯酞(3-Butylidene phathalide)、E-藁本内酯(E-Ligustilide)等；对香附四物汤挥发油活性贡献率较大的成分主要有：去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone)、香附烯(Cyperene)、β-石竹烯(β-Caryophyllene)、γ-芹子烯(γ-Selinene)、姜黄烯(Curcumene)、α-榄香烯(α-Elemene)、β-香附酮(β-Cyperone)、α-香附酮(α-Cyperone)、Z-藁本内酯(Z-Ligustilide)、菠菜烯(Squalene)等。结论：与四物汤相比，香附四物汤　　 中活性贡献较大的挥发性成分主要源于行气、止痛常用药材木香和香附的挥发性成分，如去氢木香内酯、香附烯、β-香附酮、α-香附酮等，这两味药的挥发性成分可能与香附四物汤挥发油部位治疗气滞血瘀证痛经密切相关。　　 四、香附四物汤挥发油的提取工艺与β-环糊精包合工艺的研究　　 采用水蒸气蒸馏法提取香附四物汤挥发油，经正交试验优选，最佳提取工艺为：药材当归、川芎、香附、木香分别粉碎过10目筛，与其他药材按比例组方，加10倍量水，浸泡1h，提取时间6h，香附四物汤挥发油得率约为0.4％。　　 为了增加香附四物汤挥发油的稳定性及便于保存和应用，采用β-环糊精包合技术包合香附四物汤挥发油。正交试验优选的最佳包合工艺为：β-环糊精与挥发油的比例为8:1，温度50℃，包合时间为3h。采用TLC和UV光谱扫描的方法验证了挥发油包合物的形成。采用GC-MS法对香附四物汤挥发油包合前后的成分组成进行考察，结果包合前后挥发油的总离子流图(TIC)与化学成分组成基本相同，说明β-环糊精对香附四物汤挥发油的包合不会引起挥发油成分组成的变化。　　 五、香附四物汤挥发油的质量控制研究　　 建立了香附四物汤挥发油与组方药材挥发油的TLC鉴别方法和主要活性成分藁本内酯、α-香附酮、去氢木香内酯的HPLC含量测定方法。结果表明，在不同的展开系统下，香附四物汤挥发油的TLC试验中均检出与组方药味挥发油对应的主要斑点，如藁本内酯、α-香附酮、去氢木香内酯；建立了香附四物汤挥发油藁本内酯、α-香附酮和去氢木香内酯的含量测定方法，测定结果为，香附四物汤挥发油中藁本内酯、α-香附酮、去氢木香内酯含量分别为49.28％、1.68％和1.75％，经六批香附四物汤挥发油的样品测定，三种成分含量的RSD％均在5％以内。　　 六、香附药材的质量评价研究　　 香附为香附四物汤中的重要组方药味，本文对不同产地来源的香附药材质量进行分析和评价研究。收集国内产量较大的8个产地的香附——山东泰安、河南开封、安徽亳州、江苏常州、浙江磐安、广西玉林、海南昌江、河北安国香附，对其性状特征、挥发油含量、挥发油的化学成分组成以及抗炎活性部位甲醇提取物进行了比较和聚类分析。结果：(1)山东泰安产香附(地道产区)颗粒饱满，质地坚实，气芳香，从性状上表现较佳；8个产地的香附药材中以山东泰安香附的挥发油含量最高(1.25％)。(2) GC-MS法鉴定了8个产地香附药材挥发油中的22个主要化学成分，如香附烯(Cyperene)、β-芹子烯(β-Selinene)、α-香附酮(α-Cyperone)、Aristol-9-en-3-one、β-香附酮(β-Cyperone)等。其中有效成分α-香附酮在8个产地香附药材挥发油中的相对含量：河北安国>河南开封>浙江磐安>广西玉林>海南昌江>江苏常州>安徽亳州>山东泰安；香附烯的相对含量：江苏常州>山东泰安>浙江磐安>安徽亳州>海南昌江>河南开封>河北安国。传统地道药材山东产香附挥发油中α-香附酮、香附烯的含量并非最高，该结果提示香附地道药材的内涵并非体现在某几个活性成分的含量，可能是多组分的有机组合。(3)HPLC-DAD法分析了8个产地香附药材甲醇提取物的色谱信息。以254nm下的信号最为丰富，在该波长下，对主要信号峰的保留时间和峰面积进行聚类分析，结果表明安徽亳州、浙江磐安和海南昌江香附的化学成分信息与山东泰安香附表现出较好的趋同性，而河北安国与山东泰安香附距离最远，表现出明显的趋异性。　　 同时，从山东产香附药材60％乙醇提取物中分离得到4个化合物，经鉴定为：sugetriol triacetate，α-香附酮，β-谷甾醇和β-胡萝卜苷。