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伴随着科学技术的迅速发展，先进的养殖技术和手段越来越多地应用于海水养殖，使得海水养殖的范围和种类不断扩大。然而，鱼类病害的频繁发生，严重制约了养殖产量的提高，特别是海洋弧菌性疾病，其发病迅速、控制困难，对渔业生产造成严重的经济损失。鳗弧菌（Vibrio anguillarum）属于弧菌科（vibrionaceae）弧菌属（Vibrio）,最早分离于欧洲染病的鳗鲡，能引起多种海水养殖鱼类的出血性败血症病害，因发病迅速、死亡率高，国内外学者经过多方面的研究后普遍认为鳗弧菌的毒力和致病性与鞭毛有密切关系。鳗弧菌775的全基因组序列报道结果显示，在整个基因组中包含五种鞭毛蛋白基因，分别被命名为flaA, flaB, flaC, flaD,和flaE。在本论文的研究中，以寻找高效疫苗为导向，舍去了与FlaD同源性为84%的FlaC，选取了剩余的四种鞭毛蛋白FlaA,FlaB, FlaD和FlaE，以牙鲆(Paralichthys olivaceus)为实验动物，研究了四种鞭毛蛋白在免疫保护以及免疫佐剂方面的效用。为此目的，我们运用分子生物学的实验方法和技术，通过分子克隆和载体构建，获得了FlaA,FlaB,FlaD和FlaE重组蛋白表达质粒，然后在工程菌株BL21(DE3)中表达重组蛋白，通过Ni-NTA柱吸附层析分离得到纯化的重组蛋白rFlaA, rFlaB, rFlaD和rFlaE。在检测免疫原性的实验中发现，将鳗弧菌经过灭活处理后免疫大鼠，制备的全菌抗血清中针对不同鞭毛蛋白的抗体效价不存在明显差异；然而，以活鳗弧菌制备的大鼠抗血清中针对不同鞭毛蛋白的抗体效价存在显著差异，rFlaB的抗体效价高于rFlaA, rFlaD和rFlaE的抗体效价2-4倍。为了验证是否rFlaB为主要免疫保护原，本论文分别检测了四种重组蛋白的免疫保护效应。为此目的，rFlaA,rFlaB, rFlaD和rFlaE分别通过腹腔注射牙鲆，一个月后攻毒检测免疫保护效应。结果表明，相对免疫保护率出现明显差异：rFlaB，75%；rFlaA，53.9%；rFlaD，55.7%；rFlaE，49.9%。因此，rFlaB的相对保护率高于其他三组近20%。抗血清效价检测结果、抗血清抑制细菌侵染实验结果显示rFlaB的血清效价最高，并具有最好的抑菌效应。为了检测不同鞭毛蛋白作为佐剂的应用可能，我们选用之前报道的具有一定免疫保护效应的亚单位疫苗rEsal，进行免疫佐剂效应研究。为此目的，我们分别用rEsal以及rEsal加四种鞭毛蛋白免疫牙鲆。结果表明，添加rFlaE作为佐剂时，实验组的相对免疫保护率提高20%以上，对应的抗血清中特异抗体效价上升2倍以上，免疫相关基因IL-β、TNF、IgM、MHCⅠα、CD8α、CD40、TLR5等的表达水平也明显上调3-7倍。总之，以上结果表明鳗弧菌四种鞭毛蛋白FlaA, FlaB, FlaD和FlaE均具有一定的免疫保护效应，其中rFlaB的免疫保护效率最高；同时，rFlaE作为亚单位疫苗的佐剂能显著提高疫苗的免疫保护效率。这些研究结果证明鳗弧菌的不同鞭毛蛋白具有不同的免疫学功能，为鳗弧菌的病害防治提供了新的途径。