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乙型病毒性肝炎简称乙肝(type B hepatitis)呈世界性分布,是严重危害人类健康的主要疾病之一。据估计全世界乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigrn,HBsAg)携带者约有 3.5 亿。我国是乙肝高发区,约有 1.2 亿人感染和携带乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV),占世界感染总数的 1/3。5%-10%的慢性乙肝将有可能发展为肝硬化、肝癌,是严重危害我国人民健康的主要疾病之一。目前临床上治疗乙肝多采用干扰素或核苷类药物如拉米夫啶等,但均面临同样的难题:易复发且长期抗病毒治疗又常引起病毒的耐药、变异。近年来,HBV 免疫学研究表明:宿主免疫应答异常是慢性乙肝的主要发病机制。由于缺乏有效的宿主特异性免疫反应和抗病毒药物,使乙肝的治疗成为医学治疗领域的一大难题。 特异性免疫治疗是近年来对感染性疾病提出的一种新思路和新疗法。而且,多种新型佐剂的发现又进一步拓展了免疫治疗的空间,尤以非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸为核心的寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide, CpG ODN)最具代表性,CpG ODN 具有广泛的免疫调节活性,可显著增强机体的免疫疫答,尤其 Th1 型免疫应答。而Th1 型免疫应答又是清除 HBV 感染所必需。因此,使机体恢复对乙型肝炎病毒的有效免疫识别,调动宿主免疫系统的特异性免疫治疗可能是治疗 HBV 慢性感染的有效途经。 2本次实验目的在于利用模拟 HBV 感染、免疫耐受的乙型肝炎病毒转基因小鼠(hepatitis B virus transgenic mice, HBV Tg)模型,研究重组 HBsAg 疫苗辅以 CpG ODN 的免疫治疗效果,为乙肝的临床免疫治疗提供思路和依据。同时探讨能准确而灵敏监测乙肝疗效和机体免疫状态的临床检验方法。具体实验方法如下:将 40 只 HBV Tg 小鼠随机分成 4 组:生理盐水对照组(0.1ml/只),干扰素药物组(2 万 IU/只),HBsAg 疫苗组(4 μg/只),HBsAg+CpG 组(HBsAg:4 μg /只;CpG:15 μg/只,分别注射)。初次免疫后 1 周行第 2 次免疫,后每 2 周免疫 1 次,共 4 次。其中 IFN和 CpG 为每周 1 次,共 6 次。于免疫前和末次免疫后 2 周、4 周眼球后静脉丛取血,动态观察各组小鼠血清中 HBsAg 量、HBsAg 阴转率、Anti-HBs 阳性率和 HBV DNA 拷贝数的变化。在治疗后 4 周应用病理HE 染色观察各组小鼠肝组织病变活动度以及 SP 组化法观察活肝组织中 HBsAg 表达量的改变。本实验得到的结果主要有:在免疫治疗后 2 周,HBsAg 疫苗组和HBsAg+CpG 组血清中的 HBsAg 量较免疫前和同期的 IFN 组、NS 组均有明显降低(P<0.05),并且到 4 周时降低作用依然很明显;免疫治疗后 2 周时两组 100%出现 Anti-HBs 抗体;HBsAg+CpG 组治疗后 2 周血清 HBsAg 有 1 只转阴,4 周时阴转数增加到 3 只。其它 3 组中均无阴转;免疫治疗后 2 周至 4 周 HBsAg+CpG 组的小鼠 HBV DNA 的拷贝数可降低 1~2 个数量级(P<0.05),IFN 组 2 周部分出现轻微降低但到 4 周时又和免疫治疗前和同时期的 NS 组无明显差异(P>0.05);HBsAg+CpG 组肝组织中 HBsAg 量的表达均出现不同程度的降低;病理学 HE 检测显示 HBsAg+CpG 组肝组织中浸润大量淋巴细胞,可见处于恢复期的较为规则的肝小叶。肝组织病变活动度积分(HAI)情况为HBsAg+CpG 组高于 HBsAg 组高于 IFN 组和 NS 组。本研究得出的结论主要为:CpG ODN 增强重组 HBsAg 疫苗对HBV 转基因小鼠的免疫治疗效果;重组 HBsAg 疫苗辅以 CpG ODN 可作为临床上免疫治疗慢性 HBV 感染的可行性途经;对乙肝的治疗在检测血清学各项抗原和抗体的同时,也应检测肝组织的病变程度;临床