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南瓜的基因杂合程度极高,通过自交的手段来获得纯系过于费时费力,因此探索南瓜单倍体培养诱导再生植株的技术就显的极为迫切和极其重要。离体子房或离体胚珠的组织培养是葫芦科植物获得单倍体植株的主要途径。本研究主要探索了南瓜离体胚珠液体+固体培养诱导单倍体的新方法,以无凝固剂的MS培养基为基础,对南瓜未受精胚珠培养发育过程进行观察,对胚珠消毒方法、液体培养振荡速度、培养时间、激素含量、蔗糖浓度、再生苗移栽方法等具体的胚状体诱导培养技术体系进行了研究,得出以下结果:1.升汞消毒子房后挑取胚珠进行液体培养易诱导出愈伤组织,其生长健壮、发育良好。南瓜未受精胚珠通过液体培养所形成的愈伤组织来源于珠被,胚状体来源于胚珠或者来源于胚珠形成的愈伤组织。2.试验研究了100、150、200 rpm这三个摇床转速对胚珠液体培养的影响,得出胚珠液体培养摇床最佳转速为150 rpm,此转速下液体培养的胚珠个体基本完好,能有效地控制愈伤的大小。3.液体培养中激素对南瓜胚珠的膨大和愈伤组织的形成有着关键性的作用。液体培养基最佳激素组合是0.5 mg/L 6-BA+0.25 mg/L NAA+1.0 mg/L 2,4-D,液体培养最适时间为5 d,液体培养胚珠愈伤率高达91.54%。4.南瓜胚珠液体培养愈伤诱导率中国南瓜高于印度南瓜,液体培养5 d胚珠愈伤率黄狼为94.37%,永安二号84.72%,黄狼高于永安二号9.65%。5.南瓜未受精胚珠采用液体+固体培养诱导胚状体适宜选用含激素0.5 mg/L NAA+0.05 mg/L TDZ的液体培养基5 d培养后,再转入改良Nistch+2.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA固体培养,未受精胚珠易诱导出胚状体和出胚率高。6.南瓜未受精胚珠液体培养基蔗糖最适浓度为40 g/L,比30或者60g/L好,在此浓度下,永安二号愈伤率为91.28%,黄狼愈伤率为95.15%,密本愈伤率为99.00%。7.密本未受精胚珠在MS+0.5 mg/L NAA+0.05 mg/L TDZ+40 g/L蔗糖的液体培养基中培养,添加7.5 mg/L秋碱浓度、培养5 d,愈伤胚转入改良Nistch+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA固体培养基培养有利于诱导高胚状体率,可达9.52%。8.南瓜胚状体再生苗锻炼移栽选用破坏再生苗培养瓶取苗,洗净根部培养基将苗子整个根系浸泡在2.5 g/L多菌灵溶液中5 min,然后用清水冲洗干净,移至装着拌有少量多菌灵的基质的育苗盘中,每天浇水,浇少量水是获得高成活率的再生苗移栽最好方法。综合上述研究结果,得出南瓜未受精胚珠液体培养+固体培养诱导胚状体的技术体系为,当供试南瓜品种显花蕾后,于下午采集雌花开花前1 d的子房,消毒后用解剖刀切成2-3 mm的薄片,用小镊子小心地挑取胚珠,放入液体培养基即MS+0.5 mg/L NAA+0.05 mg/L TDZ+40 g/L蔗糖+7.5 mg/L秋碱中培养,摇床转速150 rpm培养5 d后采用胚珠端插入培养基方式转入固体培养基即改良Nistch+2.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+30 g/L蔗糖+500 mg/L谷氨酰胺+6.8 g/L琼脂中培养,接着转移至改良Nistch+30 g/L蔗糖+500 mg/L水解酪蛋白+6.8 g/L琼脂中继续培养,11周后即可诱导出胚状体,成苗后经流式细胞仪倍性鉴定有8个单倍体植株,两次消毒移栽再生植株苗。