诺西肽产生菌菌种选育的研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:kenshingob
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本论文分别采用了传统诱变育种、原生质体再生与融合技术育种以及理性化筛选相结合的育种手段对诺西肽产生菌-活跃链霉菌Streptomycesactuosus进行了高产菌株的选育,从而大大加快了菌种选育的进程,并获得了适于工业生产的高产菌株。 本论文首先通过自然分离,获得了产量相对稳定且较高产的诺西肽产生菌。然后分别采用HNO2、DES和UV作为诱变剂,考察了三种诱变剂的诱变剂量与死亡率的关系;诱变剂量与产量分布的关系;从而确定了最适的诱变剂量。实验结果表明,0.1mol/LHNO2处理60min诱变效果较好,可显著提高菌种的正变率,容易获得生产能力提高的突变菌株。 其次,本论文对活跃链霉菌的原生质体制备、再生和融合条件进行了研究,考察了培养时间、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、酶解时间、PEG分子量与浓度等条件对原生质体制备、再生和融合的影响。确定了最佳的原生质体制备、再生与融合的条件。在采用传统诱变育种方法并获得优良菌株的基础上,又通过原生质体诱变、再生与融合的手段对优良菌株进行了进一步的育种,最终获得了比原始菌株产量提高51%的诺西肽产生菌。 此外,本论文还建立了耐受乙硫氨酸和耐受重金属离子Cu2+、Zn2+的理性化筛选模型,采用此模型进行理性化筛选,进一步提高了菌株的产量,得到了高产菌株EU269,菌株生产性能稳定,发酵单位达到2030μg/mL。
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