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在枣和酸枣中‘赞皇大枣’是自然三倍体枣品种,表现出多倍体所具有的抗逆性强、果实大、味甜、丰产、营养丰富等优点。目前,有关三倍体赞皇大枣的起源途径还知之甚少,多倍体育种是枣育种的一个方向,基因组原位杂交技术(GISH)和45S、5S rDNA在染色体上的比较定位技术可以有效地进行基因组同源性比较和多倍体起源的探讨。本试验通过借鉴其他作物上的GISH体系,建立枣、酸枣基因组原位杂交技术体系,探讨三倍体赞皇大枣起源,旨在为枣的细胞学研究、多倍体品种的选育以及染色体识别等方面提供依据。主要研究结果如下:1、通过去壁低渗法染色体制片,探针标记的制备、染色体DAPI浓度优化,建立了枣基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization,GISH)技术体系,并用该技术检测了枣和酸枣基因组之间的同源性。用阜平大枣做探针给酸枣杂交,用酸枣做探针给阜平大枣杂交,以及分别用阜平大枣、酸枣做探针给赞皇大枣杂交,所有染色体都显示出较强的杂交信号并均匀布满其全长。结果表明:枣和酸枣基因组之间具有高度同源性,为证实枣起源于酸枣,两者同属一个种提供了分子细胞遗传学的证据,研究也表明赞皇大枣为同源三倍体。2、5S rDNA和45S rDNA在枣和酸枣中期染色体上比较定位(1)利用染色体荧光原位杂交技术(FISH)对5S rDNA在3个枣品种和酸枣类型的中期染色体上的分布情况进行了分析。结果表明:阜平大枣、酸枣和赞皇大枣分别有6、4、4个杂交位点;阜平大枣5S rDNA杂交位点主要分布在1、2、6、7号染色体上,酸枣5S rDNA杂交位点主要分布在1、3号染色体上,赞皇大枣5S rDNA杂交位点主要分布在2、6号染色体上,杂交位点的数目和信号的分布情况表现出一定的差异性,在染色体上的分布位置不固定,45S rDNA和5S rDNA有分布在同一条染色体上的现象。(2)45S rDNA在5个枣品种和酸枣类型的中期染色体进行比较定位:阜平大枣、酸枣、铃铃枣、赞皇大枣和苹果枣分别有4、4、2、5、5个杂交位点;阜平大枣45SrDNA杂交位点主要分布在1、3、12号染色体上,酸枣45S rDNA杂交位点主要分布在2、3号染色体上,铃铃枣45S rDNA杂交位点主要分布在2号染色体上,赞皇大枣45S rDNA杂交位点主要分布在1、3、5、12号染色体上,苹果枣45S rDNA杂交位点主要分布在3、5、6、12号染色体上,杂交位点的数目和信号的分布情况表现出一定的差异性,主要分布在:短臂近着丝粒区域、长臂近着丝粒区域、着丝粒区域、短臂末端、长臂末端。从杂交结果说明赞皇大枣杂交位点正好含有阜平大枣的杂交位点,从而进一步说明赞皇大枣的起源可能与阜平大枣有关。3、以阜平大枣和玲玲枣做为封阻DNA,分别以铃铃枣、酸枣和阜平大枣做探针DNA,给赞皇大枣杂交。结果表明:阜平大枣作封阻DNA,铃铃枣和酸枣作探针DNA给赞皇大枣杂交,赞皇大枣36条染色体中24条染色体完全被封阻住没有杂交信号,而12条染色体有杂交信号;以玲玲枣作封阻DNA与赞皇大枣杂交的情况与阜平大枣作封阻情况相反,从而更进一步证实赞皇大枣起源是由阜平大枣2n配子和未知枣品种或酸枣杂交产生。