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背景:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的病理特征主要表现为滑膜细胞的增殖与炎性细胞的浸润,导致滑膜增厚、骨与软骨组织的侵蚀破坏。越来越多的研究表明,RA滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts, RASFs)的凋亡缺陷是其重要发病机制之一。因此诱导RASFs凋亡、抑制滑膜组织增殖成为治疗RA的关键。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducingligand, TRAIL)是近年来新发现的凋亡诱导配体,它具有强大的诱导肿瘤细胞凋亡的能力,但对正常细胞基本没有影响。有研究发现,在IL-1β诱导的兔膝骨关节炎模型中,通过对兔关节腔内注入带有TRAIL基因的腺病毒可使TRAIL介导的炎性滑膜组织凋亡率升高。本实验拟通过重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(human TNF-related apoptosis inducing ligand,hTRAIL)蛋白体外诱导RASFs的凋亡,以期寻找RA新的治疗方法。目的:探讨重组hTRAIL蛋白对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)凋亡的作用。方法:1.获取类风湿关节炎患者的滑膜组织,用酶消化法分离培养原代滑膜细胞。2.滑膜细胞的鉴定:滑膜细胞传至第4代,倒置显微镜下观察滑膜细胞形态,II型胶原鉴定RASFs。3.细胞增殖实验:不同终浓度hTRAIL干预滑膜细胞,继续培养不同时间后,MTT法检测其对RASFs增殖的抑制作用。4.流式细胞术:设对照组(仅加培养基)和加药组(加入含不同浓度hTRAIL的含药培养基),干预对数生长期细胞4小时后,收集细胞,上机检测RASFs的凋亡情况。实验重复三次取平均值。5. RT-PCR:设对照组(仅加培养基)和加药组(加入含不同浓度hTRAIL的含药培养基),干预对数生长期细胞4小时后,进行逆转录-聚合酶链(RT-PCR)反应,软件分析结果。实验重复三次,取平均值。6. Western bloting:hTRAIL干预对数生长期细胞4小时后,进行Western bloting实验,用凝胶图像处理系统分析实验结果。实验重复三次,取平均值。结果:1. hTRAIL对RASFs生长的影响:用不同浓度的hTRAIL处理RASFs4h、12h、24h、48h后,表现出不同程度的细胞生长抑制作用,各组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。2. RASFs对hTRAIL诱导的细胞凋亡敏感。3.与对照组比较,RASFs DR5受体mRNA的表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)。4.与对照组比较,RASFs DR5受体蛋白的表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:hTRAIL可体外诱导RASFs凋亡。