金属配合物与L-半胱氨酸、DNA相互作用的荧光性质研究及应用

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本论文针对半胱氨酸的检测、小分子荧光探针与核酸的作用机理及核酸的快速检测方法,开展了以下研究工作:在pH7.5的B-R缓冲溶液中,Cu2+可以和钙黄绿素络合形成Cu2+-钙黄绿素配合物,钙黄绿素荧光猝灭,加入Zn2+后荧光强度稍有增加,但加入半胱氨酸后,由于半胱氨酸和Cu2+发生氧化还原反应,释放出钙黄绿素,同时形成Zn2+-钙黄绿素配合物,发出强荧光。据此,我们建立了半胱氨酸的荧光分析新方法。在优化条件下,该方法的线性范围为3.0×10-7—1.2×10-5mol L-1,检出限为4.0×10-8mol L-1。此方法用于实际血清样品中半胱氨酸的测定,加标回收率结果满意。以Tb3+-普卢利沙星(PUFX)为荧光探针,研究了PUFX-Tb3+-DNA体系的光谱性质,发现DNA对Tb3+-PUFX的荧光有增强效应,且DNA浓度的增加与荧光强度的增强成正比。基于此建立一种新型检测DNA的方法,同时对其荧光增强机理进行了初步探讨。在实验优化条件下,该方法用于hsDNA和ctDNA测定的线性范围分别为3.0×10-9—1.0×10-6g mL-1和5.0×10-9—8.0×10-7g mL-1,检出限分别为2.1×10-9gmL-1和2.9×10-9g mL-1。将该方法应用于合成样品中DNA的测定,结果满意。以Cu2+-PUFX为荧光探针,探讨了其与DNA的作用方式。借助中性红染料通过荧光和紫外光谱,推测出Cu2+-PUFX主要是以插入方式与DNA作用。此外进一步通过Stern-Volmer图计算得出不同温度下的结合常数、结合位点数以及热力学常数,结果表明Cu2+-PUFX与DNA作用属于静态猝灭,自由能为负,说明两者结合属于自发方式,焓值为负,熵值为正,说明了Cu2+-PUFX主要是依靠疏水力与DNA以插入方式结合的。
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