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酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是结构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶,具有单酚酶活性和二酚酶活性,是生物体合成黑色素的限速酶,广泛存在于微生物、动植物及人体中。其抑制剂广泛应用于化妆品美白、果蔬保鲜及杀虫等方面。本论文从两大方面研究了抑制剂对酪氨酸酶的抑制活性和抗菌效应。第一部分选择了肉桂酸及其衍生物、肉桂醛及其衍生物、肉桂酸甲酯、曲酸和氰基化合物等五大类抑制剂,研究了它们对酪氨酸酶的抑制机理;第二部分以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母菌作为试验菌种,研究抑制剂的抗菌效应。
1)肉桂酸、4-羟基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸对酪氨酸酶具有单酚酶和二酚酶的抑制活性,实验结果表明,它们使单酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.58、0.27和0.50mmol/L。使二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为2.1、0.5和0.42mmol/L。研究它们对二酚酶的抑制类型,肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸属于非竞争性抑制,抑制常数分别为1.994mmol/L,和0.458mmol/L,4-羟基肉桂酸为竞争性抑制剂,抑制常数为0.244 mmol/L。抗菌实验结果表明,肉桂酸、4-羟基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑制浓度(MIC)均为500μg/mL,最低杀菌浓度(MBC)均为1000μg/mL,对白色假丝酵母菌,肉桂酸和4-羟基肉桂酸的MIC为500μg/mL,最低杀菌浓度(MFC)均为1000μg/mL,而4-甲氧基肉桂酸的MIC为250μg/mL,MFC为500μg/mL。
2)肉桂醛和4-甲氧基肉桂醛使酪氨酸酶单酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.64和0.39mmol/L。二酚酶活力下降50%的浓度(IC50)分别为0.51和0.7lmmol/L。两者均为非竞争性抑制剂,抑制常数分别为0.581和0.700mmol/L。测定对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC和MBC,结果表明,肉桂醛为250和500μg/mL,4-甲氧基肉桂醛为125和250μg/mL。对白色假丝酵母菌的MIC和MFC,肉桂醛为1000和2000μg/mL,4-甲氧基肉桂醛为62.5和125μg/mL。
3)研究肉桂酸甲酯对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性,结果表明,对单酚酶和二酚酶,它的IC50分别为0.92mmol/L和1.65mmol/L,是非竞争性抑制剂。对大肠杆菌的MIC和MBC为500μg/mL和1000μg/mL,对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC和MBC为250μg/mL和500μg/mL,对白色假丝酵母菌的MIC和MFC为1000μg/mL和2000μg/mL。
4)测定曲酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为32μmol/L,对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度IC50)为20μmol/L。研究其抑制类型,结果表明,曲酸对二酚酶活力表现为可逆混合型抑制作用,对游离酶的抑制抑制常数(K1)和对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为13.0和100.0μmol/L。抗菌实验结果表明,曲酸对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为1000μg/mL,当浓度为2000μg/mL时,不能对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌达到杀灭的效果。对白色假丝酵母菌的MIC和MFC分别为1000μg/mL和2000μg/mL。
5)对氰基苯酚和3,4-二羟基氰苯对蘑菇酪氨酸酶均有单酚酶和二酚酶的抑制活性,对单酚酶的IC50分别为0.22mmol/L,和9.2μmol/L,对二酚酶的IC50分别为0.80mmol/L和13.5μmol/L。研究它们的抑制类型,结果表明,对氰基苯酚为竞争性抑制剂,3,4-二羟基氰苯为非竞争性抑制剂。而通过测定这两者对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌效应,结果表明,对氰基苯酚的MIC和MBC为500和1000μg/mL,4-二羟基氰苯为1000和2000μg/mL。对白色假丝酵母菌的MIC和MFC,对氰基苯酚为500和1000μg/mL,3,4-二羟基氰苯为1000和2000μg/mL。