急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是以进行性低氧血症,呼吸窘迫为特征的临床危重症,目前在治疗上无特效疗法,病死率仍高达40%以上,寻求安全有效防治手段,仍是目前重要的研究课题。中医学认为毒瘀互阻,肺气衰败是ARDS的关键病机。课题组前期研究结果显示,益气化瘀解毒方对LPS致ARDS模型大鼠具有一定的防治作用,可显著减低促炎因子及通路关键蛋白的表达水平。为明确益气化瘀解毒方可升高抑炎因子表达,改善促炎/抑炎失衡作用,并全面探讨益气化瘀解毒方干预ARDS的蛋白作用网络,拟开展以下研究:目的研究益气化瘀解毒方对LPS诱导的ARDS大鼠的保护作用及对抑炎因子IL-4、IL-10表达水平的影响,验证益气化瘀解毒方预防ARDS的疗效,同时通过筛选各实验组肺组织中蛋白差异,探讨益气化瘀解毒方防治ARDS的分子生物学机制,为名老中医经验方临床应用提供科学依据,为防治ARDS提供诊疗新思路。方法30只雄性SD大鼠随机等分为5组(n=6),正常组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。以尾静脉注射LPS方法制备全身炎症反应所致的ARDS大鼠为模型,中药各组运用不同浓度的益气化瘀解毒方预防给药,观察各实验条件组大鼠肺大体情况、光镜观察肺组织病理变化、采用酶联免疫法检测血清抑炎因子IL-4、IL-10表达水平;取上述实验正常组、模型组、中药中剂量组大鼠肺组织经样品处理后,运用TMT标记方法筛选组间差异蛋白,使用IPA软件进行疾病与生物功能分析和经典通路分析,并进行蛋白网络分析。结合蛋白质组学结果及文献分析,选取核心蛋白进行基于质谱的绝对定量蛋白质分析技术(parallel Reaction Monitoring,PRM)验证,再将验证出的蛋白进行生物信息学分析。结果1益气化瘀解毒方对ARDS大鼠的保护作用及抑炎因子表达水平影响。肺大体:与空白组比较,模型组肺脏肿胀,表面色泽暗红、散在出血点,中药各组均不同程度好转。肺组织病理:与空白组相比,模型组大鼠肺泡内出血、肺间质水肿、肺泡壁塌陷程度显著,肺组织内大量炎性细胞浸润,中药各组较模型组减轻,出血、水肿程度改善,炎性细胞渗出减少。抑炎因子表达水平:与空白对照组相比,大鼠血清中IL-4表达水平在模型组及中药各剂量组中显著降低(p<0.001);中药各剂量组大鼠血清IL-4表达水平均高于模型组,中药低剂量组较模型组升高明显(p<0.01),中药中、高剂量组较模型组显著升高(p<0.001)。与空白对照组相比,大鼠血清IL-10在模型组表达水平升高(P<0.001);大鼠血清IL-10在中药中、高剂量组的表达水平较模型组显著升高(P<0.001)。2益气化瘀解毒方防治LPS致ARDS大鼠的蛋白质组学研究。模型组和正常组相比共有353个差异蛋白,中药组和正常组相比共有392个差异蛋白,中药组和正常组相比共有165个差异蛋白。疾病与生物功能分析显示,模型组较正常组在炎症反应、中性粒细胞迁移、细胞内环境稳定以及内皮细胞的增值、凋亡和死亡等方面有显著的功能差异;中药组较模型组在炎症反应、中性粒细胞迁移、细胞内环境稳定、内皮细胞发育、巨噬细胞活化以及内皮细胞增值、凋亡和死亡等方面有显著的功能差异。经典通路分析显示,模型组较正常组在急性炎症反应、巨噬细胞中一氧化氮和氧自由基的产生、Nrf2介导的氧化应激反应、CXCR4信号通路、IL-8信号通路、AMPK、mTOR、GP6、cAMP、肌动蛋白骨架等信号通路变化有关,中药组在上述通路有较好的干预作用。质谱验证结果显示中药可调控ARF5、CAV1、VAMP3、ILK、KNT1、IGG2B等蛋白表达,生物信息学分析显示其作用机制主要与减少中性粒细胞迁移、减轻炎症反应以及蛋白磷酸化密切相关。结论益气化瘀解毒方对LPS诱导的ARDS大鼠具有保护作用,可能通过升高血清中抑炎因子,调控促炎/抑炎失衡防治肺损伤;经蛋白质组学实验、生物信息学分析及质谱验证显示,中药防治ARDS大鼠的作用机制,主要与减少中性粒细胞迁移、减轻炎症反应以及蛋白磷酸化密切相关。