【摘 要】
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超声波对螺旋藻体细胞具有很好的破碎效果,超声破碎得到的粗酶液依次经过35％~80％的硫酸铵分级沉淀、DEAE-FF阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析处理,可以得到SDS-PAGE电
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超声波对螺旋藻体细胞具有很好的破碎效果,超声破碎得到的粗酶液依次经过35％~80％的硫酸铵分级沉淀、DEAE-FF阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析处理,可以得到SDS-PAGE电泳纯的产品.氨基酸分析表明,钝顶螺旋藻Fe-SOD由193个残基组成,其化学分子量为19.8kU,小于经SDS-PAGE凝胶电泳测定的21kU的物理分子量.等离子体发射光谱测定表明,酶的每个亚基含有1个Fe离子和1个锌离子,而基本不含Cu离子和Mn离子.经傅立叶变换红外光谱和圆二色性光谱测定表明,该酶的α-螺旋结构超过60％,而β-折叠和无规卷曲结构含量少于40％.该酶在279nm处有最大紫外吸收峰,这与它含有较多的Trp和Tyr有关.酶的最适温度是25℃,而在磷酸盐缓冲液和Tris-HCI中的最适pH分别是7.8和8.2.差示扫描量热技术测定和热稳定性分析表明,该Fe-SOD的在50℃(下能稳定存在,而在高于55℃时极易失活,而实验表明,该酶具有较强的pH稳定性.活性电泳表明:H2O2对酶有很强的抑制作用,而NaN3和低浓度CH3CN对酶没有抑制作用,但高浓度的CH3CN会让酶沉淀析出.活性电泳还表明:尿素、盐酸胍和SDS均能引起酶变性,而DTT对酶没有影响,与尿素和盐酸胍需要高浓度和长时间作用相比,SDS只需较低浓度和几分钟就能引起酶变性沉淀.
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