论文部分内容阅读
背景 子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)的发病率日趋上升,已成为严重影响妇女健康和生育的常见病之一,但迄今该病的发病机制尚不明确。近年研究发现环境毒物二(口恶)英与EMs发病相关,目前已从环境流行病学和动物实验研究发现暴露于环境毒素二(口恶)英的个体和动物,其EMs的发病率显著增高,但环境毒素二(口恶)英如何致EMs发病,其机理仍然尚不清楚。 EMs作为一种多因素致病的疾病,目前推测二(口恶)英可能通过多种途径诱导EMs的发病,其中通过免疫机制是目前研究的热点和重点。作为免疫系统内细胞间信号传递的介导因子,细胞因子被认为在EMs的病理生理变化中起着关键性作用,而二(口恶)英本身也是免疫系统及细胞因子的重要调节子。IL-6及TNF-α是近年研究较多的两个与EMs相关的细胞因子,其功能失调被认为与EMs发病密切相关,而在动物在体与离体实验发现二(口恶)英可调节IL-6、TNF-α等多种细胞因子的表达,故我们推测在人体中二(口恶)英可能通过调节IL-6、TNF-α参与EMs的发生和发展。 本研究在人子宫内膜细胞原代培养的基础上从mRNA和蛋白水平测定二(口恶)英是否影响IL-6、TNF-α的分泌,并进一步比较EMs和非EMs患者的子宫内膜对二(口恶)英诱导的敏感反应是否不同,从而探讨二(口恶)英是否通过调节IL-6及TNF-浙江大学硕士学位论文a的表达参与EMs的发病,以期为二嗯英参与EMs发病进一步提供实验依据,并探索其可能的作用靶分子及机制。 材料和方法 EMS组在位子宫内膜取自在本院住院手术及病理组织学确诊的卵巢子宫内膜异位症患者(n二13),对照组子宫内膜取自同期手术及病理组织学证实的非EMS的子宫肌瘤患者(n=15)。在离体子宫内膜细胞培养基础上,首先用免疫组化S一P二步法鉴定所培养的子宫内膜细胞,再用MTT法测定不同浓度TCDD(0,0.InM,InM,10nM,IOOnM)作用子宫内膜细胞24小时对其活性的影响,然后用对照组子宫内膜细胞做剂量效应(n=4),分别以。,0.olnM,0.xnM,InM,xonM,loon.叨浓度的TCDD作用子宫内膜细胞24小时后采用real一t ime PCR和EL工SA法测定工L一6和TNF一Q mRNA和蛋白的表达,在此基础上进一步参考相关文献选取IOnMTCDD分别作用对照组和EMS组子宫内膜细胞24小时,同样以real一t ime PCR和ELISA法测定IL一6和TNF~a mRNA和蛋白的表达。 用One一way ANOVA、Kruskal一WalliSH、t检验、Mann一WhitneyU和WilcoxC,n检验的统计学方法进行多组和两组间数据比较分析,检验水准Q=0.05,双侧。所有实验数据用SPSS10.O统计软件包进行处理。 结果1.IOnMTCDD作用24小时后能诱导体外培养的人子宫内膜细胞表达更高水平 的TNF一。蛋白,并且以EMS组患者的诱导效应更明显(P<0 .05)。2.10nMTCDD作用24小时后可抑制EMs组子宫内膜细胞工L一6蛋白的表达 (P<0.05),但对照组中无明显改变(P>0 .05)。3.IOnMTCDD作用24小时后体外培养的人子宫内膜细胞IL一6和TNF一a的 mRNA表达无明显改变(P>0.05)。