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(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇是合成抗癌药物克唑替尼的手性前体,可由2,6-二氯-3-氟苯乙酮经乙醇脱氢酶催化还原制备。在酶催化的还原反应中常常需要辅酶的参与,而昂贵的辅酶成为其工业化应用的关键限制性因素之一。为了解决辅酶再生的问题,本文利用基因工程的方法,实现了在E.coli BL21(DE3)中共表达乙醇脱氢酶(ADH)和葡萄糖脱氢酶(GDH),并以此重组菌为催化剂,不对称还原2,6-二氯-3-氟苯基乙醇酮制备(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇。首先根据芽孢杆菌的GDH基因序列和高加索乳杆菌的ADH基因序列,通过基因合成的方式分别得到ADH和GDH的基因片段。将GDH和ADH基因片段分别重组到pET-28a载体中,得到表达载体pET-28a-gdh和pET-28a-adh。然后将两个质粒分别转化入E.coli BL21(DE3)中,获得重组菌E.coli BL21-GDH和E.coli BL21-ADH,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析显示在分子量为30 kDa和29kDa处有明显条带。对两种酶诱导表达条件进行优化的结果表明,E.coli BL21-GDH在20℃,0.1mmol/L的IPTG终浓度下表达8h,可实现GDH的最大可溶性表达,粗酶液中GDH的酶活为9.8U/ml,总蛋白的比活力为9.61U/mg。E.coli BL21-ADH在16℃,0.1mmol/L的IPTG终浓度下表达10h,能够实现ADH的最大可溶性表达,粗酶液中ADH的酶活为2.3U/ml,总蛋白的比活力为1.91U/mg。构建重组E.coli BL21-ADH/GDH,实现了乙醇脱氢酶和葡萄糖脱氢酶的双质粒共表达。经过表达条件优化后,结果表明E.coli BL21-ADH/GDH在25℃、IPTG终浓度0.2 mmol/L、诱导时间12h时可溶性表达最佳。对重组菌E.coli BL21-ADH/GDH催化2,6-二氯-3-氟苯乙酮的反应条件进行了优化。结果表明,当体系在反应温度为30℃,pH值为7,投料量为7%的条件下反应时间24h,(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇的产量达到最高,转化率为90.35%,产物e.e.值大于99%。最后为了进一步扩大反应体系,对共表达重组菌株E.coli BL21-ADH/GDH进行高密度发酵培养,培养30h后OD600可达到90以上。酶催化反应体系从40ml放大到2L,投料80g,经过20h的偶联催化反应,转化率达到98%。体现了较好的应用前景。