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位于内质网膜上的Ⅱ型跨膜蛋白——ATF6是介导未折叠蛋白反应的关键蛋白,激活后不仅能够进入细胞核提高内质网相关性降解(ERAD)基因的表达,还可以调节并直接与XBP1蛋白相互作用,从而促进未折叠或错误折叠蛋白的折叠及降解,缓解内质网应激(ERS)对细胞造成的损伤,恢复内质网稳态。动物机体内的多种组织、器官、细胞,包括山羊胎盘滋养层细胞中都有ATF6的表达。研究表明胎盘滋养层细胞对妊娠过程的发展至关重要,多种病理因素都可能引起ERS从而导致细胞凋亡,对山羊而言,胎盘滋养层细胞的凋亡对其妊娠的影响还不清楚。所以,本研究以ATF6为切入点,为研究ATF6对山羊胎盘滋养层细胞凋亡的影响奠定基础。本试验主要运用PCR、慢病毒干扰/过表达载体构建、慢病毒包装、实时荧光定量PCR、Western Blotting、流式细胞术等技术手段,构建出山羊ATF6干扰慢病毒载体,初步测定了抑制ATF6表达对内网应激引起的胎盘滋养层细胞凋亡的影响。主要结果如下:1.从山羊卵巢中提取RNA,反转录获得cDNA模板,通过设计引物和PCR技术扩增获得山羊ATF6基因的编码序列(CDS)片段,与NCBI公布的山羊、绵羊、藏羚羊等反刍动物相似度分别高达100%、99%和96%,通过基本理化性质分析,得出其相对分子质量为157996.66u,理论等电点为4.92,不稳定系数为47.44,脂肪族氨基酸指数为28.92,总平均亲水性为0.883;2.设计并成功构建出三对针对ATF6基因CDS的重组干扰慢病毒载体,分别是pCD513B-U6-shRNA-ATF6-CDS-1、pCD513B-U6-shRNA-ATF6-CDS-2、pCD513BU6-shRNA-ATF6-CDS-3;3.利用HEK293T细胞成功包装出山羊ATF6基因干扰慢病毒,通过转染山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)检测其ATF6基因mRNA和蛋白表达水平,筛选出干扰效率达到70%的干扰载体pCD513B-U6-shRNA-ATF6-CDS-2用于转染山羊胎盘滋养层细胞(GTC),得到shATF6-GTC用于后续试验;4.经衣霉素(Tm)处理,shATF6-GTC和shNC-GTC均出现早期凋亡,shATF6-GTC早期凋亡率明显低于shNC-GTC,表明抑制ATF6基因表达后,可能会促进Tm处理的GTC细胞的存活。