论文部分内容阅读
目的研究逍遥散对慢性束缚应激焦虑模型大鼠行为学及下丘脑P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、P-P38以及Caspase-3表达的影响,探讨逍遥散抗焦虑效果及其作用机制。方法1.28只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组；正常组不做任何处理,模型组、逍遥散组和氟西汀组,通过14天慢性束缚应激建立肝郁脾虚证焦虑模型,逍遥散组和氟西汀组于每天上午束缚前分别灌服逍遥散混悬液(0.61g/100g·d)以及氟西汀(0.2mg/100g·d),正常组和模型组灌服去离子水。2.观察各组大鼠的宏观表征、体重变化、糖水消耗实验、高架十字迷宫实验、新环境进食抑制实验。3.使用Elisa方法分析各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-a含量。4.使用免疫组化、Western-blotting,以及RT-PCR方法检测各组大鼠下丘脑P38、P-P38和Caspase-3水平变化。结果1.慢性应激肝郁脾虚证焦虑大鼠模型的建立慢性束缚应激14天后,模型大鼠出现体重增加减慢,精神烦躁、毛发散乱无光泽、喜扎堆或蛰伏角落、及大便稀等外观表现变化。高架十字迷宫试验大鼠5分钟开放闭臂进入次数、开放臂臂停留时间、运动总距离、中央区进入次数以及中央区停留时间等均明显下降。糖水消耗量虽然统计学没有意义,但是模型组均低于其余三组,存在着一定的趋势性。逍遥散组与氟西汀组对慢性束缚应激大鼠体重、高架十字迷宫实验、新环境进食抑制实验、及糖水消耗实验各项指标具有明显改善效果。2. Elisa检测血清结果模型组大鼠血清中IL-1p、IL-6和TNF-α含量明显升高,高于正常组、氟西汀组以及逍遥散组(P<0.05,P<0.01)。与正常组相比,逍遥散组和氟西汀组没有统计上差异(P>0.05),表明逍遥散和氟西汀能降低了血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量,对焦虑有一定的作用。3.免疫组化结果第14天,免疫组化观测各组大鼠下丘脑P38、P-P38、Caspase-3免疫组化光密度分析,三个指标的模型组IOD比其余三组均明显高。与正常组相比,模型组大鼠3个指标的积分光密度较正常组均高,有统计学上意义(P<0.05,P<0.01)；正常组与逍遥散组、氟西汀组间没有存在统计学差异；药物组之间无统计学差异(P>0.05)；模型组的大鼠下丘脑P38、P-P38、Caspase-3阳性面积较其余3组大鼠明显增高,均存在着统计学上显著差异(P<0.01)。4. Western-blotting结果实验观察慢性束缚应激后大鼠下丘脑中的P38MAPK、P-P38MAPK以及Caspase-3蛋白表达含量,结果发现14天慢性束缚应激导致焦虑模型组大鼠的下丘脑中P38、P-P38、Caspase-3表达上升,与正常组比较有统计学差异(P<0.05,P<0.01),但P38没有统计上差异,其原因有待进一步研究。与模型组相比,逍遥散组与氟西汀组的蛋白表达水平均明显低于模型组。5. RT-PCR结果实验观测各组大鼠中P38MAPK及Caspase-3 mRNA水平变化。实验结果显示逍遥散与氟西汀干预治疗的大鼠在经过14天慢性束缚应激所致焦虑后,下丘脑的P38 mRNA表达,正常组与模型组比较有差异(P<0.05)。虽然模型组和两个药物组之间不存在统计意义,但是模型组均高于其余三组,存在着一定的趋势性。观察Caspase-3 mRNA表达,与正常组比较,模型组的mRNA表达水平明显高,有统计意义(P<0.01)。以上结果提示：114天慢性束缚束缚应激方法可制备肝郁脾虚证焦虑动物模型。通过动物宏观表征、行为学变化、糖水消耗、逍遥散干预以方测证,表明14天慢性束缚应激方法可以成功复制出肝郁脾虚证焦虑大鼠模型。2慢性束缚应激焦虑大鼠血清炎性因子IL-1p、IL-6和TNF-a含量增高,逍遥散可降低其血清炎性因子含量。3慢性束缚应激所致焦虑症与下丘脑P38、P-P38以及Caspase-3表达增加有关。逍遥散和氟西汀能下调下丘脑P38、P-P38以及Caspase-3表达。提示逍遥撒可有效抑制P38MAPK信号通路的活化达到抗焦虑作用。为逍遥散的临床合理性及治疗焦虑症提供了实验依据。