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糖类物质是自然界储量最为丰富的一大类有机化合物,是除蛋白和核酸之外的又一类重要的生物大分子。但人们对糖类物质的生物学研究远远落后于前两者,主要是因为糖的种类多,结构复杂且多为异构体,存在着微观不均一性。通常单糖、寡糖仅在基团-CHOH构型排列上有所不同,采用常规方法对其分离较为困难。糖在紫外区无吸收,采用示差折光检测时,灵敏度低。糖类化合物的分析存在分离和检测两大难题,为此常采用衍生化处理,将糖类组分转变为带发色基团的分子,改变糖分子的局部结构,从而可以在高效液相色谱柱上实现分离,随之进行紫外或荧光检测。目前已有大量标记试剂被用于糖类化合物的衍生化,但在实际应用中大都存在着这样或那样的缺点,因此开发高灵敏的标记试剂意义重大。本文重点研究了几种糖类化合物标记试剂的合成和表征,考察了标记试剂的光谱性质,优化了衍生反应条件和色谱分离条件,运用新型标记试剂建立了高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析糖类化合物的新方法,并将建立的方法应用于实际样品的分析。具体工作如下:第一章:综述了糖类化合物分析的现状。介绍了糖类的结构特点及分析工作的难点,现代分离技术(气相色谱、高效液相色谱和毛细管电泳)在糖类分离中的应用情况,糖类化合物的检测手段,糖类衍生化的分类及常用衍生试剂,以及糖类化合物质谱分析的现状。第二章:两种标记试剂:1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP),1,2-苯并咔唑-9-乙氧基碳酰肼(BCECH)的设计合成、结构表征、光谱性质研究。通过对比新型试剂与以往试剂的光谱性质和结构差异,预测其在改善分离和提高检测灵敏度等方面的可行性。第三章:以新型标记试剂NMP作为柱前衍生试剂,建立了简单、灵敏的糖类组分的反相高效液相色谱测定方法。对实际花粉多糖样品的单糖组成进行测定,检验所建立方法的可行性。将NMP与传统试剂对比研究,总结了吡唑啉酮类衍生物在HPLC-ESI-MS分析中的规律性内容:根据质谱数据提出了该类衍生反应的机理;色谱出峰顺序规律并给出了相应解释;电喷雾质谱裂解模式及其原因:全面比较了三者的优缺点。第四章:研究了酸性催化条件下糖类化合物的衍生化的特点。以1-氨基蒽为例,讨论糖类还原胺化衍生物在HPLC-ESI-MS中的应用情况,就其质谱鉴定和分离问题进行讨论。以1,2-苯并咔唑-9-乙氧基碳酰肼为标记试剂优化了此类反应的衍生条件,在反相液相色谱上实现了7种常见糖的色谱分离和质谱鉴定(包括5种单糖、1种二糖、1种三糖),就进一步分离的潜力和思路提出了设想。