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目的实验采用细胞外记录微电泳法观察神经内分泌活性肽优洛可定2（Urocortin2,Ucn2）对吗啡成瘾大鼠戒断状态下中脑腹侧被盖区（Ventral tegmental area,VTA）神经元自发放电（Spontaneous discharge, SPD）的影响以及与T-Ca2+通道关系的研究，探讨其在该过程中的作用机制，为其用于临床治疗阿片类药物成瘾提供理论依据。方法取50只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，随机分为吗啡成瘾模型组35只和对照组15只。模型组采用剂量递增法腹腔注射盐酸吗啡建立大鼠吗啡成瘾模型，对照组在相同条件下给予生理盐水，12天后采用纳洛酮（5mg kg-1）诱导吗啡成瘾戒断模型。采用细胞外记录微电泳法分别观察对照组与模型组VTA神经元自发放电活动。借用多管玻璃微电极向模型组VTA核团电泳不同浓度Ucn2及促肾上腺皮质激素释放因子2（Corticotrophin releasing factor2, CRF2）受体阻断剂astressin（AST），观察Ucn2对VTA神经元放电影响且其是否存在浓度依赖性，以及Ucn2对VTA神经元的作用是否通过与CRF2受体结合所致。另外，微电泳谷氨酸（Glutamate, Glu）+Ucn2、Glu+AST，观察Ucn2对VTA神经元谷氨酸能神经传递的影响。此外，微电泳蛋白激酶A（Protein kinase A, PKA）及蛋白激酶A抑制剂（Protein kinase Aantagonist, H-89）、T-型钙通道阻断剂米贝地尔（T-type calcium channel blocker, Mibefradil），进一步观察Ucn2对吗啡成瘾大鼠VTA神经元影响是否通过PKA及T-型钙通道发挥作用。结果1．实验过程中因个体差异导致模型组死亡2只，余33只模型组戒断症状评分为（17.32±2.13）分，记录到对照组和模型组VTA核团放电形式主要有三种即不规则放电、规则放电和爆发式放电。对照组VTA神经元平均放电频率为（13.76±4.25）Hz，模型组VTA神经元平均放电频率为（22.14±4.12）Hz比对照组显著增高（P<0.01），模型组VTA神经元不规则放电和爆发式放电神经元构成比明显增多，而对照组VTA神经元则以规则放电为主，可见不规则放电，偶见爆发式放电。两组放电形式构成比差异有统计学意义（P<0.05）。2．均向对照组和模型组VTA核团内微电泳不同浓度Ucn2，观察其自发放电频率均随Ucn2浓度由低到高呈一定规律递减，两者之间存在线性关系且与给药前相比差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。向模型组电泳入AST，其放电频率逐渐恢复到给药前水平，较单独给予Ucn2，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；同时电泳入Ucn2、AST，其放电频率无明显变化，差异无统计学意义。3．单独向模型组VTA神经元电泳Glu，神经元放电频率显著增加，其兴奋作用可被Ucn2抑制，反之加入AST后，Glu引起的VTA神经元兴奋作用不会被AST所抑制。4．向模型组VTA神经元同时微电泳入Ucn2、PKA，其放电频率较不给药明显降低，继续微电泳入H-89，自发放电频率逐渐恢复到不给药水平；同时微电泳入Ucn2、H-89，其放电频率较不给药无明显改变；同时电泳入Ucn2、PKA、米贝地尔三种药物，其放电频率较仅仅电泳入Ucn2、PKA明显降低。结论本实验提示Ucn2可抑制吗啡成瘾大鼠VTA神经元自发放电，并且呈剂量依赖性。其抑制作用可能是Ucn2与CRF2受体结合后，通过影响PKA信号途径，抑制VTA内神经元的T-Ca2+通道开放，从而抑制吗啡成瘾大鼠VTA经元的异常高频放电。