拟南芥锌指蛋白AtZFP6调控抗逆及互作蛋白的研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:snesw
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AtZFP6(AT5G18650.1),是一种具有多个类指状结构串联而成的E3型泛素连接酶,属于C3HC4环指型锌指蛋白。该基因全长804bp,共编码268个氨基酸。本研究对拟南芥的AtZFP6基因进行了抗逆、花发育及与之互作蛋白等方面的研究。首先,将AtZFP6构建到植物表达载体pROK II中;获得过表达植物载体35S:AtZFP6后,利用根癌农杆菌介导的蘸花法转化野生型拟南芥,通过筛选获得T3代纯合的过表达植株OE1和OE2,同时利用三引物法筛选获得纯合的俩个突变体株系SALK1(CS24967)和SALK2(CS82893)。为了研究AtZFP6是否与抗逆相关,我们将获得的OE1、OE2、SALK1、 SALK2、35S(拟南芥转空pROKⅡ,对照)和WT(野生型)种子分别用不同浓度梯度的JA、SA、ABA和NaCl溶液处理,统计种子发芽率,测量根长和鲜重,分析AtZFP6基因对不同胁迫的抗逆能力;实验结果表明:这些株系在JA、SA、ABA和NaCl四种胁迫下的种子发芽率,根长和鲜重无显著区别,显示AtZFP6基因在拟南芥抗逆过程中不起作用。通过对OE1、OE2、SALK1、SALK2、35S和WT整个生长周期的观察,分析AtZFP6基因对植物生长发育的影响:表型观察结果表明:AtZFP6基因过表达对拟南芥的花期有显著地延迟作用。利用酵母双杂交技术研究了与AtZFP6的互作的蛋白,将AtZFP6构建到PGBKT7中,作为Bait载体,将不同家族的转录因子构建到pGADT7-Rec中,形成Prey文库,并分别转化Y2H和Y187酵母感受态细胞,筛选阳性转化酵母进行双杂交实验,筛选出与AtZFP6蛋白互作的转录因子蛋白共13个,这些与AtZFP6互作的蛋白包括bZIP家族中的AT3G17609.2,AT3G56850.1,AT4G34590.1;ERF家族中的AT4G11140.1,AT3G60490.1,AT4G17490.1;MYB家族中的AT5G62470.2和AT4G05100.1;MADS-box家族中的AT1G69120.1和AT1G22130.1;WRKY家族中AT5G07100.1,bHLH家族中的AT5G43650.1及Dof家族中的AT4G21080.1。为了研究AtZFP6在细胞中的定位,构建了荧光定位表达载体35S:AtZFP6-GFP,利用基因枪技术瞬时转化洋葱表皮细胞,观察AtZFP6蛋白的分布情况,结果表明:AtZFP6蛋白在细胞核和细胞质中均表达。
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