本文建立了小单孢菌属放线菌的选择性分离方法和特异引物PCR快速鉴定该属放线菌的方法，通过16S rRNA基因序列分析证明了方法的有效性，并对四株可能是新种的分离株进行了初步的分类学研究。　　 小单孢菌属(Micromonospora)是小单孢菌科(Micromonosporaceae)中最大的一个属，是产生多种抗生素和酶抑制剂的重要微生物资源。本研究建立了一套高效的用平板培养技术选择性分离该属放线菌的方法，主要涉及对样品进行湿热预处理，用添加了萘啶酮酸(50μg/ml)、放线菌酮(50μg/ml)、制霉菌素(50μg/ml)和新生霉素(25μg/ml)的燕麦琼脂或稀释营养琼脂进行分离培养。　　 通过选择性分离共获得386株小单孢菌样的菌株，根据放线菌分群规则分为六个颜色类群。基丝为深色的类群其菌株孢子表面生长有更多的疣状凸起，具有抗菌活性的菌株比例更高。　　 微生物分离株的开发利用需要有准确快速的鉴定手段。本研究设计了一对小单孢菌属的特异PCR引物(M558F和C1028R)，它们能够特异性地扩增该属菌株16S rRNA基因上470bp左右的片段，达到快速鉴定该属菌株的目的。通过扩增相关科属的模式菌株和本研究获得的代表性分离株的目的序列，引物的特异性和敏感性都得到验证。　　 特异引物PCR鉴定和16S rRNA基因序列分析均表明，93.3％的小单孢菌样分离株确为该属菌株。以99％的16S rRNA基因序列相似性为界限，42株代表性小单孢菌分离株形成16个分支散布在小单孢菌属的系统发育树中，其中9个分支显示为新的基因型。系统发育分析的结果进一步证实本研究所建立的选择性分离和特异引物PCR的方法适用于发现多种多样的小单孢菌。　　 鉴于小单孢菌科的Catellatospora和Verrucosispora两个属与小单孢菌的形态非常相似，本研究同时设计了Catellatospora和Verrucosispora两个属的特异PCR引物C2F/C3R和V2F/A3R，并用相关科属的模式菌株和本研究获得的分离株进行了验证。这两对引物的应用将增加特异引物PCR快速鉴定小单孢菌属放线菌的可靠性。　　 对菌株RtIII47，RtIII94，RtII195和RtII141进行了进一步分类研究，16S rRNA基因系统发育分析、形态特征和生理生化特征表明其很可能为小单孢菌属的新种。