【摘 要】
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目的通过对美国生物技术信息中心开发的基因表达综合数据库中肝细胞肝癌数据进行挖掘分析并探讨其中差异最大的长链非编码RNA在肝细胞肝癌中作用及其与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路、上皮-间质转化的关系。方法通过用R语言程序对基因表达综合数据库数据进行分析,结果以热图（pheatmap）、火山图（Volcano Plot）呈现,分析得出肝细胞肝癌中心与癌旁组织有统计学差异的长链非编码RNA（lon
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目的通过对美国生物技术信息中心开发的基因表达综合数据库中肝细胞肝癌数据进行挖掘分析并探讨其中差异最大的长链非编码RNA在肝细胞肝癌中作用及其与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路、上皮-间质转化的关系。方法通过用R语言程序对基因表达综合数据库数据进行分析,结果以热图（pheatmap）、火山图（Volcano Plot）呈现,分析得出肝细胞肝癌中心与癌旁组织有统计学差异的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）,排除没有组织学差异的lnc RNA后,其中差异最大的为lnc RNA 00844。收集病例资料完整且行肝癌切除术患者的肝细胞肝癌组织及其对应癌旁组织标本,通过荧光定量反转录酶-聚合酶链锁反应（q RT-PCR）分别测定标本中lnc RNA 00844的表达量,通过配对样本t检验统计分析肝细胞肝癌组织及癌旁组织两组标本中lnc RNA 00844的表达差异,同时应用卡方检验分析肝细胞肝癌组织中lnc RNA 00844的表达与临床病理特征的关系,独立样本t检验分析组间lnc RNA 00844表达差异。免疫蛋白印迹法（Western blot,WB）检测其组织中磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路中p-PKD2、p-Akt、p-GSK-3β的表达情况,免疫组织化学方法检测p-GSK-3β、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况,卡方检验及Spearman等级相关性分析对肝细胞肝癌中lnc RNA 00844的作用进行分析,及其与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路,上皮-间质转化三者的相关性。结果1.肝细胞肝癌组织中lnc RNA 00844相对表达量为（0.69±0.08）,癌旁组织中lnc RNA00844相对表达量为（1.06±0.07）,lnc RNA 00844在肝细胞肝癌组织的相对表达量明显低于癌旁组织（t=3.36,p＜0.05）。临床病理特征结果表明在肝细胞肝癌组织中,低分化组较中-高分化组lnc RNA 00844的表达低水平较低,合并有门静脉癌栓中较无门静脉癌栓组lnc RNA 00844的表达低水平较低,差异具有统计学意义（p＜0.05）。2.Western blot检测结果表明,与癌旁组织比较,肝细胞肝癌组织中p-PKD2、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达显著升高,差异有统计学意义（t=2.232,p＜0.05;t=2.364,p＜0.05;t=5.476,p＜0.01）。3.E-cadherin在肝细胞肝癌组织中的阳性表达率较癌旁组织低（p＜0.05）。肝细胞肝癌组织组织中N-cadherin的阳性表达率高于癌旁组织中的N-cadherin（p＜0.01）。4.相关性分析表明,lnc RNA 00844在肝细胞肝癌组织中的表达与p-PKD2呈负相关性（r=-0.595,p＜0.05）,p-PKD2在肝细胞肝癌组织中的表达与p-Akt呈正相关性（r=0.389,p＜0.05）,p-Akt在肝细胞肝癌组织中的表达与p-GSK-3β呈正相关性（r=0.368,p＜0.05）。5.肝细胞肝癌中p-GSK-3β与E-cadherin表达呈负相关（r=-0.423,p＜0.01）,与N-cadherin表达呈正相关（r=0.278,p＜0.05）。结论1.肝细胞肝癌组织中lnc RNA 00844表达量较低,同时lnc RNA 00844在肝细胞肝癌的低分化组低表达,在合并有门静脉癌栓组表达同样较低,提示lnc RNA 00844可能在肝细胞肝癌的发生,分化程度和门静脉侵袭转移中起抑制作用。2.免疫蛋白印迹及免疫组化结果提示在肝细胞肝癌组织中存在信号通路磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路的激活及上皮-间质转化过程。3.相关性分析结果提示在肝细胞肝癌中lnc RNA 00844可能通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路来影响上皮-间质转化的发生及肿瘤细胞的增殖及侵袭转移过程。
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