猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）给养猪业造成严重的经济负担,主要症状表现为母猪的繁殖障碍和各年龄猪的呼吸系统疾病。该病首次报道于20世纪80年代,现已成为养猪业中最重要的疾病之一。该病的病原是PRRS virus（PRRSV）。PRRSV是一种正链RNA病毒,属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属成员。PRRSV基因组的ORF1a和ORF1b编码复制酶多聚蛋白pp1a和pp1ab,它们最终酶解为14种非结构蛋白:Nsp1α,Nsp1β,Nsp2/3/4/5/6,Nsp7α,Nsp7β以及Nsp8/9/10/11/12。其中Nsp2比较特殊,它是PRRSV基因组编码的最大蛋白,最容易发生突变,在病毒复制周期中执行着不同的生物学功能。非结构蛋白Nsp12是病毒复制所必须的,而对于它如何发挥功能还并不清楚。本研究首先通过聚合酶链式反应（PCR）扩增HP-PRRSV HuN4毒株Nsp2（1-233aa）和Nsp12的cDNA,并将其克隆到pET-28a载体上,命名为pET-28a-Nsp2（1-699bp）和pET-28a-Nsp12。然后表达并纯化His-Nsp2（1-233aa）和His-Nsp12两种重组蛋白,利用这两个蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠并制备了三株抗PRRSV Nsp2的单抗（分别命名为4A12,4G8,8H11）和一株抗PRRSV Nsp12的单抗（命名为1E5）。Western blot和IFA实验结果表明:4A12,4G8,8H11可以识别外源性表达的Flag-Nsp2（1-233aa）和内源性表达的HP-PRRSV HuN4 Nsp2;1E5单克隆抗体可以识别外源性表达的Flag-Nsp12和内源性表达的HP-PRRSV HuN4 Nsp12。通过Western blot和ELISA的方法鉴定了4A12和1E5的识别的B细胞表位。研究结果显示:4A12识别的B细胞表位是¹⁸⁸ELSDDSNRPV¹⁹⁷。1E5识别的B细胞表位是¹³⁰KANATSMRFH¹³⁹。通过从NCBI数据库得到的不同PRRSV毒株间序列的比较发现,¹⁸⁸ELSDDSNRPV¹⁹⁷在2型PRRSV的HP-PRRSV毒株中相对保守,而¹³⁰KANATSMRFH¹³⁹在2型PRRSV的HP-PRRSV毒株中高度保守,但在2型PRRSV的经典毒株以及1型PRRSV中却不保守。总之,本项研究通过细胞融合技术制备了3株抗HP-PRRSV Nsp2单克隆抗体和1株抗Nsp12的单克隆抗体,为进一步研究Nsp2和Nsp12的的功能奠定了基础。我们的研究结果表明,1E5可以被用来建立一种检测HP-PRRSV感染的新方法,对于PRRSV的系统进化分析和流行病学调查研究都具有重要的价值。