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由Valsa mali引起的腐烂病是危害我国苹果树最为严重的生物灾害。明确病菌的分子致病机制对有效防控苹果腐烂病意义重大。本研究在已建立的苹果腐烂病菌(Valsa mali)ATMT突变体库的基础上,重点对苹果腐烂病菌突变体G1-G50进行了表型筛选,得到了致病缺失突变体,并对突变基因进行了克隆和序列分析;同时开展了突变体G23和野生菌株sdau11-175的转录组测序分析,初步分析了突变基因在转录水平上的表达和调控作用。研究结果如下:1.突变体G1-G50 50个突变体中,仅有G23在生长发育和致病性方面与野生型菌株sdau11-175有明显差异。进一步对突变体G23的表型进行分析,发现G23菌株致病性完全丧失,生长速率明显减慢;与野生型相比,G23气生菌丝生长较弱,菌落表面较为湿润;在25℃黑暗条件下培养,突变体G23始终不产生子实体。2.参照TAIL-PCR、hiTAIL-PCR和FPNI-PCR方法,建立了适合苹果腐烂病菌pBHt2和pKO1-HPH两种载体ATMT突变体的改进hiTAIL-PCR方法,该方法较原始的TAIL-PCR方法有着更高的特异性和扩增效率,能获得更长的特异性产物。3.使用改进的hiTAIL-PCR方法,克隆得到了突变体G23的T-DNA左右侧翼序列。通过Blast比对分析,确定了T-DNA插入突变基因的位置为苹果腐烂病菌第12号染色体69537和69547之间,位于一个编码假定蛋白的基因VMIG09677第一个外显子内。通过突变基因全长克隆和序列分析,发现该基因与编码camp-dependent protein kinase pathway protein(Som1)基因同源性最高,因此将其命名为VmSom1。VmSom1基因大小为2723bp,编码大小824aa的蛋白质。通过对VmSom1蛋白氨基酸序列进行分析,发现该蛋白与Mo Som1(Magnaporthe oryzae)和SomA(Aspergillus fumigatus)结构相似,均存在LIM结构域和核定位信号肽。这说明VmSom1蛋白在功能上可能与Mo Som1和SomA有着相似性。蛋白同源性分析显示,在丝状真菌中,Som1蛋白在同属真菌内存在高度的同源性,但不同属内同源性较低。这说明VmSom1在功能上可能与MoSom1和SomA有着一定的差异性。4.采用Illumina Hiseq2500高通量测序平台完成了苹果腐烂病菌sdau11-175和突变体G23的转录组测序,共获得11.75Gb Clean Data。转录组分析表明,G23相对于sdau11-175,共有差异表达基因(DEG)857个,上调表达295个,下调表达562个。对差异表达基因进行了GO分析、KOG分析和KEGG分析,发现大部分差异表达基因与V.mali的物质运输代谢相关。G23转录组中共有4个肌球蛋白和2个肌动蛋白等11个细胞骨架相关基因出现下调表达,因此VmSom1可能直接或间接调控胞内极性运输。通过比对分析,在G23转录组数据中发现了7个下调表达转录调节因子(2个C2H2锌指型转录因子,1个Zn2Cys6型转录因子、Myb-like转录因子、HMG-box转录因子、Bromodomain转录因子和Velvet转录因子),而这些下调表达转录因子涉及到孢子形成、菌丝性别分化和DNA损伤修复等方面。实时荧光定量PCR验证了18个基因,所有基因的表达趋势均与上述转录组测序结果一致。