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目的:观察坏死细胞对小鼠腹腔渗出细胞增殖、分化的影响,进一步确证坏死细胞对巨噬细胞前体细胞分化的诱导作用。
方法:分别用坏死细胞、凋亡细胞及坏死细胞裂解液与小鼠腹腔渗出细胞共培养,并采用形态观察、细胞集落计数法、MTT法、免疫荧光染色法及NO荧光探针原位杂交等实验方法对小鼠腹腔渗出细胞增殖、分化情况进行检测。
结果:不同浓度坏死细胞裂解液的培养基培养的腹腔渗出细胞均有不同程度的增殖,且以含10%和20%坏死细胞裂解液的培基培养增殖最为明显,而50%坏死细胞裂解液的培基培养增殖曲线呈下降趋势,不同浓度坏死细胞裂解液培基培养细胞CD14和CD68的阳性细胞率高于对照组和50%坏死细胞裂解液刺激组,且以20%坏死细胞裂解液培养组增高最为显著;坏死细胞与凋亡细胞共培养组的细胞集落计数分别为16.23±3.05/孔和2.20±0.65/孔,坏死细胞共培养组的细胞集落数高于凋亡细胞共培养组(P<0.05),坏死细胞共培养组的CD14、CD68阳性细胞率分别为58.67±4.04%、96.33±3.79%,明显高于凋亡细胞共培养组的21.33±5.13%、46.67±3.51%(P<0.05);20%坏死细胞裂解液分别刺激贴壁细胞与非贴壁细胞,5天后非贴壁细胞组出现大量的细胞集落,而贴壁细胞组没有细胞集落出现;坏死细胞裂解液作用的非贴壁腹腔渗出细胞CD14和CD68阳性细胞率分别为63.33±4.50%、94.83±1.25%,分别高于完全培养基培养对照组细胞的5.67±1.53%和55.67±3.79%(P<0.05);实验组细胞的NO探针荧光强度与面积比值为72.71±22.17明显高于对照组细胞的47.31±15.70(P<0.05)。
结论:本实验结果表明坏死细胞能够促进小鼠腹腔渗出细胞分裂增殖并分化为巨噬细胞,分化的细胞来源于小鼠腹腔渗出细胞非贴壁细胞群。