CaHPR1和CaPHD1分别在辣椒应答高温和青枯菌侵染中的表达和功能分析

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高温、病原菌以及其他逆境胁迫是影响植物生长发育和农作物生产的主要不利因素。为能有效提高植物抗(耐)逆境的能力,增加农作物产量,基于当前植物抗(耐)逆境分子机制研究进展,运用基因工程技术培育耐受性作物已成为现代农业研究的一项重要的内容。本文研究,我们分离获得一个能够响应高温胁迫基因CaHPR1和一个抵御病原菌相关基因CaPHD1,主要结果如下:1.从辣椒均一化的cDNA文库中,我们分离出一个编码386个氨基酸残基,分子量约为42.27 KDa的CaHPR1基因和一个编码220个氨基酸残基,分子量约为25.31 KDa的CaPHD1基因。同时,我们也克隆出它们的上游启动子序列,分析发现它们均存在多个与应答逆境胁迫相关的顺式作用元件。因此,我们推测CaHPR1和CaPHD1均可能参与辣椒的逆境胁迫响应机制。2.通过融合绿色荧光蛋白(GFP)报告基因并在本氏烟草中瞬间表达,实验表明,CaHPR1定位在细胞膜和细胞核上,而CaPHD1只定位在细胞核上。3.通过实时荧光定量PCR(qPCR)分析辣椒植株经过青枯菌侵染或高温胁迫处理或外源激素水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)、乙烯利(ETH)等处理下CaHPR1和CaPHD1的转录表达水平。结果显示,CaHPR1的转录表达水平在外源激素ABA和高温(HT)处理下被诱导上调;而CaPHD1的转录表达水平在SA、MeJA、ABA、ETH等外源激素以及青枯菌侵染下被诱导上调。这些结果都暗示着,CaHPR1可能参与辣椒的高温胁迫应答和ABA信号通路;而CaPDH1可能通过协同SA/茉莉酸(JA)或乙烯(ET)信号通路参与青枯菌侵染的应答。4.为进一步验证CaHPR1在辣椒耐高温应答中的作用,我们用CaHPR1超表达转基因烟草植株进行实验,结果显示,CaHPR1超表达转基因烟草的耐高温能力显著增强,同时耐高温相关基因(smallNtHSP、NtHSF2、NtHSP18、NtHSP70 NtHSP90和NtHSP101)和活性氧(ROS)清除相关基因(NtAPX1、NtAPX2和NtCA T1)的转录表达水平同对照植株相比有明显的上调。相比之下,运用辣椒的病毒诱导基因沉默(VIGS)技术沉默CaHPR1可显著降低辣椒耐高温相关基因(CaHSP24、ER-smalICaHSP和Chl-smallCaHSP)的转录表达。这些结果都充分表明CaHPR1基因在辣椒应答高温胁迫的途径中可能扮演着重要的角色。5.我们的数据显示,沉默CaPHD1的辣椒能显著增强辣椒植株对青枯菌侵染的敏感性,同时下调抗病相关基因(CaNPR1、CaDEF1、CaACC oxidase、CaABR1、CaPR1和CaHIR1)的转录表达。另一方面,在辣椒叶片上瞬间表达CaPHD1可引发显著的细胞死亡过敏反应并能上调抗病相关标记基因的转录表达。这些结果都表明,CaPHD1在辣椒抵御青枯菌侵染应答中起到正调控的作用。
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