色素上皮细胞衍生因子抑制大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的实验研究

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目的:探讨局部应用色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)滴眼液抑制大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的作用及其可能机制。 方法:建立 SD 大鼠(受体)72 只和 Wistar 大鼠(供体)36 只同种异体间穿透性角膜移植模型。每只受体动物均行右眼手术,术后的 SD 大鼠随机平均分成实验组(10nM的 PEDF 滴眼液)和对照组(赋形剂滴眼液)。术后每天对术眼角膜用显微镜观察和照相,记录植片存活时间;定量分析角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)面积;比较各组移植排斥指数(rejection index,RI),包括角膜植片透明度、水肿、和新生血管程度;术后 1 周,2 周,3 周,1 月,2 月,3 月,每个组随机处死 6 只动物,取其角膜标本进行苏木素/伊红(hemotoxylin and eosin,HE)染色观察新生血管生长和炎性浸润情况;透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察超微结构;免疫组织化学方法检测 PEDF 的表达;流式细胞技术(flow cytometry,FCM)监测动物外周血中的 T 细胞亚群变化、CD4+/CD8+比值。 结果: 1. 实验组与对照组角膜植片平均存活时间分别为 22.564±0.321d 和 12.125±0.313d,实验组比对照组角膜植片存活时间显著延长(P﹤0.01﹚。 2. 实验组角膜新生血管面积在术后 1 周,2 周,3 周,1 月,2 月时较对照组显著减少(P﹤0.01 或 P﹤0.05)。 3. 实验组 RI 在 1 周,2 周,3 周,1 月,2 月时明显小于对照组(P﹤0.01或 P﹤0.05)。 4. 实验组比对照组血管生长少和炎性浸润程度轻;在术后 2 周,3 周,1 月,2 月实验组 PEDF 的表达水平显著高于对照组(P<0.05 或 P<0.01)。
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