论文部分内容阅读
丙烯酸甲酯-丙烯酸共聚物P(MA-A A)具有良好机械性能、化学稳定性和弹性,且分子中含有羧基活性基团,适合用作酶固定化的载体材料,但其生物相容性不理想,酶保留活性较低。为了提高固定化酶的活性,本文选择具有良好的亲水性能和生物相容性的羽毛多肽作为改性剂,采用物理共混的改性方法,提高聚合物的生物相容性。静电纺纳米纤维膜具有较大的比表面积和极高的孔隙率。它作为酶固定化的载体材料,能够提高载酶量和减小底物扩散阻力,有利于提高固定化酶的催化效率,且易于从反应液中回收。本文利用静电纺丝技术制备P(MA-AA)/羽毛多肽复合纳米纤维膜,并以此复合纳米纤维膜为载体实现辣根过氧化物酶的固定化,研究了固定化酶的活性、载酶量、反应动力学和稳定性。具体研究内容如下:(1)采用溶液聚合法制备了丙烯酸甲酯-丙烯酸共聚物P(MA-AA),研究了单体浓度、引发剂浓度、反应温度和反应时间对聚合反应的影响。产物经红外光谱和凝胶渗透色谱表征,确认其化学组成和分子量。(2)通过静电纺丝制备P(MA-AA)纳米纤维,并用扫描电镜观察纤维表面形貌。通过考察溶液的浓度、纺丝电压、纺丝液的流速、接受距离对纤维形貌和直径的影响,确定最佳纺丝条件为:纺丝液浓度为28%、纺丝电压为17kV、纺丝液流速为0.2mL /h、接收距离为15cm。扫描电镜观察显示,此条件下纤维形态较好,平均直径为567nm。(3)在最佳条件下,将不同含量的羽毛多肽加入P(MA-AA)溶液中,磁力搅拌得到均匀的纺丝液。利用静电纺丝技术制备了不同羽毛多肽含量的P(MA-AA)/羽毛多肽复合纳米纤维。利用扫描电镜和红外光谱表征了复合纳米纤维形貌和化学组成;研究了羽毛多肽含量对复合纳米纤维力学性能的影响;通过接触角和蛋白质的吸附测试评估纳米纤维膜生物相容性。结果表明:随着羽毛多肽含量的增加,纤维的直径逐渐减小;力学性能测试结果显示,随着羽毛多肽含量的增加,纤维膜断裂强度先增大后减小,当羽毛多肽含量为10%时最大,断裂伸长率逐渐减小。随着羽毛多肽含量增加,复合纳米纤维膜的亲水性越好,抗蛋白污染的能力越强,表现出更好的生物相容性。(4)以P(MA-AA)纳米纤维膜和P(MA-AA)/羽毛多肽复合纳米纤维膜为载体,固定化辣根过氧化物酶。研究了酶固定化的影响因素以及固定化HRP的动力学参数和稳定性。实验结果表明:与P(MA-AA)纳米纤维固定化HRP相比,P(MA-AA)/羽毛多肽复合纳米纤维膜固定化HRP具有更高的载酶量和活性保留值。与游离HRP相比,复合纳米纤维膜固定化HR能在较宽的pH条件下保持较高的活性,而且具有更好的热稳定性、储存稳定性和重复使用性。