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犬的乳腺肿瘤是兽医临床上常见的一种肿瘤疾病,且与人类乳腺肿瘤有很多相似之处,是作为人乳腺肿瘤研究的良好模型。细胞周期网络调控的异常与肿瘤的发生、发展和转移等密切相关,深入的研究细胞周期的调控网络将会给肿瘤的控制与治疗开辟一条崭新的思路。其意义不但可以为肿瘤的免疫学疗法和抗癌药物的研制提供新的作用靶标,也可以针对细胞周期调控网络中的各种关键点来控制细胞的生长、分裂,从而阻止癌细胞的增殖。实验选用体外培养的自然发生的犬乳腺肿瘤原发病灶和转移病灶细胞系CHMp株和CHMm株为研究对象,经浓度分别为0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10u mol/L的紫杉醇处理后,分别作用Oh、12h、24h、48h、72h。应用LightCycler2.0实时定量PCR仪,采用SYBR荧光染料的方法,对CHMp两种犬乳腺肿瘤细胞系中CHMm进行检测。使用CyclinDl mRNA、p27kip mRNA、PCNA mRNA、bcl-2mRNA、p53mRNA对实验数据进行分析,通过绘制标准曲线得出内参基因和目的基因的LightCycler Software4.1扩增效率,运用相对定量Pfaffl法对所测得的各个基因的实验组CT值、对照组CT值和空白组CT值进行计算。实验结果显示:紫杉醇能够诱导犬乳腺肿瘤原发病灶细胞和转移病灶CHMp细CHMm胞发生凋亡。CHMp细胞中,的含量降低,在CyclinDl mRNA紫杉醇作用12h0.1μmol/L后出现统计学差异(P<0.05),24h后差异极显著(P<0.01);而细胞中,CHMm在CyclinD1mRNA紫杉醇作用12h时差异显著(P<0.01)。1μmol/LCHMp细胞中,的含量升高,且在p27kip mRNA杉醇作用12h后差异显著0.1μmol/L紫(P<0.05),在紫杉醇诱导肿瘤细胞产生细胞毒性导致细胞死亡率不高的情况下,48h时p27kip含量升至最高;而mRNA细胞中,CHMm的含量在12h之后差异显著p27kip mRNA且在(P<0.01),紫杉醇作用72h时升至最高。0.1μmol/L和CHMp细胞中,CHMm的含量随着紫杉醇浓度的升高、作用时间的延PCNA mRNA长,呈逐渐降低的趋势,且各个浓度和作用时间之间均差异显著(P<0.01),具有浓度-时间效应。细胞中,CHMp在紫杉醇作用24h之后差异显著(P<0.05),且在紫杉醇诱bcl-2mRNA导肿瘤细胞产生细胞毒性导致细胞死亡率不高的情况下,的作用浓度下降最大;而1μmol/L细胞中,CHMm与1u mol/L,10μmol/L之间差异显著(P<0.01),0.01μmol/L,0.1μmol/L且在紫杉醇诱导肿瘤细胞产生细胞毒性导致细胞死亡率不高的情况下,作用12-24h1μmol/L之间降低明显。bcl-2mRNA细胞中,CHMp在紫杉醇诱导肿瘤细胞产生细胞毒性导致细胞死亡率不高的p53mRNA情况下,作用48h时升至最高,且差异显著(P<0.01);而0.1μmol/L细胞中,1μCHMmmol/L作用24h比0.01μ mol/L作用48h时升高的比值大,差异显著(P<0.01)p53mRNA